Instituto Politcnico Nacional

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA

Productos Naturales

* HPLC *

Septiembre del 2011

Holgun Hernndez Laura Lisset Minjares Aguilar Sofa Carolina Snchez Jurez Anglica Monserrat

USO DEL EQUIPO

-Los reactivos que se utilizan para el manejo del equipo son de alta pureza grado HPLC.

-El agua utilizada es Agua Ultra Pura: con un valor se resistividad mnima de 18M.cm y con TOC mximo de 50 ppb (filtrada con membrana de 0.45 m)

COMPONENTES BSICOS DE HPLC:

1. Bomba de alta presin 2. Inyector 3. Columna Analtica 4. Detector 5. Software de adquisicin y proceso de datos 4

MANEJO GENERAL DEL EQUIPO:

Encender El equipo a una lnea de suministro no break

Lavar el equipo

Agua ultra pura caliente

Purgar la bomba

Encender el mdulo de desgasificacin y purgar manualmente cada una de las lneas

Preparar fase mvil

Filtrar (si es necesario) y Desgasificar

Colocar solventes

En recipientes adecuados

Purgar las lneas

Flujo de 1 5 mL/min

Conectar la columna

Verificar que los empaques estn bien cerrados

Establecer flujos deseados

De acuerdo al procedimiento a realizar

Verificar la presin

Que no sobrepase las especificaciones de la columna

Llenar los viales y colocarlos en el carrusel

Prender el detector de UV , verificar las pruebas de diagnstico y establecer la longitud de onda

Purgar el inyector

Flujo de 1 mL/min

Programar parmetros requeridos

De acuerdo al procedimiento que se va a utilizar

Dejar correr el equipo

Estableciendo: orden de inyecciones, a partir y hasta que vial se realizaran las inyecciones, nmero de inyecciones, volumen de inyeccin y tiempo entre cada inyeccin

Lavar el equipo

Y apagarlo

INTERPRETACIN DE CROMATOGRAMAS

-Ancho de pico: es el ancho de un pico cromatogrfico medido por extrapolacin de las tangentes hasta la lnea base.
-Factor de capacidad: ( k ) relaciona el equipo de distribucin de la muestra dentro de la columna con las propiedades termodinmicas de la columna . Es una medida de tiempo transcurrido en la fase estacionaria en relacin con el tiempo transcurrido en fase mvil.

K = factor de capacidad t = tiempo de retencin medido a partir del tiempo de inyeccin y hasta la elusin del pico en su punto mximo. ta = tiempo de elusin de un componente no retenido

- Factor del coleo: (T) medida de simetra del pico, unidad para los picos perfectamente simtricos y su valor aumenta a medida de que la simetra es ms pronunciada
A medida que la asimetra del pico aumenta, la integracin y la precisin son menos confiables.

-Platos tericos (N): eficiencia expresada como cantidad adimensional que refleja el nmero de veces que el soluto se reparte entre las dos fases durante su paso a travs de la columna.

Generalmente en valor >2000 es aceptable para HPLC, U-HPLC o CG

N = nmero de platos tericos t = tiempo de retencin W = ancho del pico

Pico nico adecuadamente integrado: Pico de forma simtrica y no muestra coelusin. La lnea base es estable y tienen el mismo nivel (lnea base plana. Ejemplo de integracin de lnea base a lnea base.

Integracin de picos sin resolver: Para la integracin en este caso, el punto ms bajo entre dos picos, el valle, debe ser seleccionado como el punto final.

- Tiempo De Retencin:( TR ) Es el tiempo entre la inyeccin de una muestra y la aparicin de un pico de soluto en el detector de una columna cromatogrfica.

- Tiempo Muerto: ( TM ) Es el tiempo que tarda en salir de la columna una sustancia no retenida