Inmunidad frente a Bacterias intracelulares

Alfredo Prieto Martn

Coordinador del programa de doctorado en Inmunologa de la UAH Mencin de calidad del MECD.

Universidad de Alcal
alfredo.prieto@uah.es http://www.alfredoprieto.tk
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Bacterias intracelulares
Tienen capacidad para sobrevivir y multiplicarse en el interior de los fagocitos
1. Son poco toxicas las clulas infectadas sobreviven
2. Vas de entrada: Aire, sangre, alimentos.

3. Incubacin larga y enfermedad persistente.

4. Son inaccesibles a los anticuerpos y buscan la fagcitosis

 Afectan a especies especificas Entrada

Infecciones por bacterias intracelulares

Mordiscos de insectos Ritketsia Mucosa respiratoria M tuberculosis y Legionella pneumophilla Mucosa intestinal Salmonella enterica y Listeria monocytogenes

Incubacin suele ser larga

Sistema inmune puede abortar infeccin antes de que produzca enfermedad o eliminarla completamente, pero lo mas frecuente con estas bacterias es que se produzcan infecciones crnicas por un equilibrio entre la proliferacin del patgeno y su eliminacin. La enfermedad la causa la interaccin SI patgeno
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Tipos de Bacterias Intracelulares

Facultativas M. Tuberculosis M. Bovis M. Leprae S. Enterica serovar typhi Brucella L. Phenumophila L. Monocytogenes Francisella tularensis Obligadas

Rickettsiae
Chlamydiae

C. trachomatis
C. Pneumoniae

Inmunidad frente a bacterias intracelulares.

Su eliminacin depende de mecanismos de inmunidad celular
dependiente de clulas T Inaccesibles a anticuerpos y resistentes a fagocitos ordinarios. Detectadas por clulas T en MHC Antgenos presentados en MHC II a clulas T CD4 que

activan fagocitos y en MHC I y CD1 a CTL CD8 y DN.

Respuestas de TCD4 y macrfagos son muy importantes, tambin respuestas de CTL tanto de tipo ab como gd. La toxicidad y lesin se debe principalmente a la respuesta inmunitaria del husped
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Patogenicidad de bacterias intracelulares

La infeccin esta separada de la enfermedad clnica.
La infeccin persiste frente a la respuesta inmune. El patgeno esta adaptado para coexistir con el husped enfermo La infeccin potencialmente puede producir acumulativos y ms severos en estadios tardos daos

La patognesis es fuertemente dependiente de la respuesta inmune

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La infeccin por una bacteria intracelular ideal

Caractersticas esenciales:
1. Estilo de vida intracelular 2. Las clulas T protegen interaccionando con clulas infectadas no directamente con los microbios. 3. Estas infecciones estimulan hipersensibilidad de tipo retardado por linfocitos T y macrfagos. 4. Provocan reacciones tisulares granulomatosas, su ruptura provoca la diseminacin de las bacterias.

Caractersticas condicionales: 5. No son directamente txicas y la patologa es resultado de las reacciones inmunes. 6. Las bacterias intracelulares coexisten con sus habitat celulares durante largos periodos.
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Tipos de bacterias intracelulares: facultativas y obligadas

Facultativas
Mycobacterium, Salmonella, Brucella, Legionella, Listeria, Francisella infectan fagocitos mononucleares pero tambin otras clulas Tienen estrategias de supervivencia intracelular

Obligadas
Rickettsia y Chlamidiae No sobreviven fuera de clulas y prefieren fagocitos no profesionales como las clulas endoteliales. Tienen molculas de invasin que les facilitan entrar en fagocitos no profesionales en los que es ms fcil sobrevivir
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Modelos de infeccin intracelular: 1. Tuberculosis

8 millones de nuevos casos, 2 millones de muertes, 2000 millones de infectados (90% permanecen sanos 10% desarrollan enfermedad)
Es un bacillo aerobio obligado prefiere tejidos con alta presin de oxigeno Llega en aerosoles infecta pulmones de donde puede diseminarse a otros tejidos Son reconocidos por clulas T no convencionales Incubacin larga infeccin durmiente persisten en 9 granulomas y larga duracin

Glicolpidos de Mycobaterium

Contienen abundantes glicolpidos que les hacen resistentes al complemento y a pH extremos.

Son reconocidos por el SI innato y hacen de el Mycobacterium un buen adyuvante en inmunizacin (Adyuvante de Freund aceite/agua + BCG) Adyuvante secuestra el material antignico y lo lleva a los fagocitos a los que estimula para que inicien la activacin de clulas T antgenoespecficas. Calmette y Guerin desarrollaron una cepa atenuada de M bovis llamada Baccillus CalmetteGuerin (BCG)

Protocolo e inmunizacin primero con adyuvante completo despus dosis de recuerdo con adyuvante incompleto

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Vacuna BCG
cepa atenuada de M. bovis llamada Baccillus Calmette-Guerin (BCG) que es utilizada como una vacuna viable:
previene la tuberculosis miliar en nios la que por diseminacin hematgena produce innumerables ndulos.

No protege de modo completo contra la tuberculosis pulmonar en los adultos

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Listeriosis
L. monocytogenes Anaerobio facultativo gram+
Afecta al ganado y raramente al humano. Para investigar se usa un modelo experimental en ratn. Factores de virulencia: listeriolisina promueve escape del fagosoma al citoplasma Sobrevive en macrfagos en reposo pero es eliminada rpidamente en los activados

Provoca una infeccin aguda que termina tras la activacin de los linfocitos T
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Salmonellosis
16 millones nuevos casos, 600.000 muertes
S. enterica incluye unas 2000 serovariedades S. enterica typhi restringida a humanos S. enterica typhimurium en ratn (modelo animal) Se transmite a travs de comida provocando diarrea

Pueden atravesar pared intestinal y provocar bacteriemia que provoca fiebre y tifus
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Entrada y supervivencia en las clulas del husped

1.

Invasin es entrada (fagocitosis) inducida por el patgeno

Destino Fagocitos no profesionales tienen escasa actividad antibacteriana son el hbitat ideal para el microbio que usa receptores de superficie celular para invadir sus clulas husped.

2.

Granulocitos polimorfonucleares Clulas efectoras antibacterianas. Son muy destructivos para los microbios.
1. 2. tienen actividad antibacteriana constitutiva. son de vida corta. Deben ser continuamente reemplazados. su falta (netropenia) es un factor de susceptibilidad a estas infecciones

3.

Fagocitos mononucleares su actividad antibacteriana depende de su estado de activacin que es controlado por receptores PAMP_ y clulas T. Son Hbitat de infeccin y clula efectora antibacteriana
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Adhesin e invasin
Las bacterias intracelulares tienen molculas inductoras de la invasin

Mecanismo Zipper Sealizacin y endocitosis del receptor al que se han adherido

Yersinia (integrina) y Listeria (internalina-e-cadherina de la clulas epitelial humana) murina no por mutacin en posicin 16

M leprae se une a la laminina de los nervios perifricos y clulas de Schwan.

MecanismoTriger mecanismos no dirigidos a un receptor especifico

S. enterica y Shigella sp. inducen reorganizacin de la actina del citoesqueleto causa rufling e incorporacin indiscriminada de otras partculas (macropinocitosis).
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Receptores para el reconocimiento de microbios

Los fagocitos profesionales expresan receptores para reconocer para estructuras conservadas de patgenos que normalmente no estn presentes en el husped.
patrones moleculares asociados a patgenos (PAMP).

Receptores para reconocimiento de patrones

Inducen fagocitosis proinflamatorios. y liberacin de mediadores

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Tipos de estos receptores

1. Familia del receptor toll diferencia distintas estructuras nicas de los microbios: glicolpidos, lipoprotenas, hsp, flagelina y oligonucleotidos raros que inducen sealizacin intracelular y activacin celular.
Glicoprotenas tipo lectina C con especificidad frente a azucares comnmente expresados superficie bacteriana y que inducen fagocitosis Molculas de superficie CD14 con especificidad por gliocoplpidos como el LPS de gram- y los lipoarabinomananos (LAM) de las mycobacterias.

2. 3.

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Receptores de reconocimiento de patrones

Que median la unin microbiana y su fagocitosis

Receptores lectina tipo C
Tipo manosa reconoce Nacetilglicosamina, manosa (LAM con manosa terminal) glucosa y L-fucosa Tipo fucosa une Lfucosa

Lipoarabinomananos terminados en arabinosa se reconocen por medio de CD14

Que reconocen molculas del husped

Igs C C3R reconoce varios ligandos C3d, secuencia RGD b-glucanos no estimula secreccin de radicales oxidantes. Fibronectina FnR se une a secuencia RGD

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Funciones de los receptores

Union y endocitosis receptores basureros,
CD14 y receptores de manosa.

Activan a la clula TLR y FcR

Celulas endoteliales y epteliales intestinales tienen Tlr
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Ligandos de los TLR

TLR2 LAM y lipoprotenas de Mycobacterium
TLR3 RNA bicatenario TLR4 LPS de muchas bacterias gram- y hsp TLR5 flagelina bacteriana de g+ Listeria y g- Salmonella TLR6 peptidoglicano zymosan TLR9 oligonucleotidos CPG dinucleotidos sin metilar caracteristicos del DNA bacteriano

Generalmente interaccionan con sus ligandos en el fagosoma

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Fagocitosis
1. Fagosoma temprano pH neutro o ligeramente bsico actividad de defensinas (bactericidas para algunas cepas de Salmonella y Listeria) y protenas bsicas
2. Fagosoma tardio pH cido dbil por accin bomba de protones 3. Fagolisosoma ph cido fuerte enzimas lisosomales degradan bacterias previamente lisadas Patogenos (Mycobacterium, Legionella Salmonella y Clamydia) detienen maduracin y viven en fagosomas en un estadio entre 1 y 2
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Interferencia de maduracin del fagosoma

Glicolipidos de mycobacteria inmpiden la fusin fagolisosomal aunque los anticuerpos antipared revierten esta capacidad
Su pared celular rica en lpidos les hace muy resistentes contra el ataque enzimtico

Detienen la maduracin del fagosoma excluyendo la bomba de protones del fagosoma

Secretan ureasa que produce NH4 que tampona el pH del fagosoma

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Hierro
Se produce una competicin por el hierro entre la bacteria y el husped Extracelular en transferrina y lactoferrina Transferina es captada por el CD71 TFrR El hierro se libera de la transferrina en las condiciones reductoras del fagosoma temprano en el que les gusta vivir a estas bacterias

Tienen protenas de unin a hierrro sideroforos, protenas de unin a transferrina, protena similares al grupo hemo Los macrfagos inactivados educen su expresin de receptor de transferrina esto es suficiente para matar Legionela por deprivacin de hierro pero insuficiente para matar Mycobacterium que tiene un sistema muy eficiente de obtencin de hierro con exoquelinas y mycobactinas
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Molculas efectoras txicas

La destruccin de las bacterias se consigue por molculas txicas altamente reactivas
ROI (superoxido peroxido de hidrogeno) son muy activos contra bacterias extracelulares Daan DNA, protenas y lpidos de membrana. Contra intracelulares son ms importantes los RNI la iNOS inducida por IFNg produce oxido ntrico NO y peroxinitrito ONOO Granulocitos y monocitos pero no macrfagos tienen mieloperoxidasa que produce cido hipocloroso KO de iNOS son susceptibles a Listeriosis y tuberculosis

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Evasin de la destruccin por radicales

Unin a CR1/CR3 no induce el estallido respiratorio
Glicolipido fenolico de M leprae consume radicales oxidantes

S. enterica con SPI2 excluye NADPH oxidasa de la membrana del fagosoma

Bacterias intracelulares producen sueroxido dismutasa y catalasa que detoxifican O2 y H2O2
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Otras adaptaciones: Evasin al citoplasma, invasin de clulas adyacentes e induccin de apoptosis Evasin
estrategia de supervivencia muy exitosa pues la lisis bacteriana se limita al fagolisosoma para evitar daos colaterales en el macrfago Listeria virulenta produce listeriolisina. La delecin del gen responsable la vuelve avirulenta

La evasin es reducida en macrfagos activados por el IFNg

Invasin de clulas adyacentes

Desde clulas de Kupffer a hepatocitos adyacentes induciendo formacin de seudpodos y fusin de membranas. Pueden invadir otras clulas sin exponerse

M. tuberculosis, S. enterica L. monocytogenes inducen apoptosis de clulas diana tras su incorporacin

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bacterias intracelulares

Inmunidad natural
Fagocitosis por neutrfilos y macrfagos.

Algunas resisten degradacin por macrfagos.

Clulas NK y NKT.

Inmunidad especfica

Principalmente celular: linfocitos CD4, CD8 y DNgd y macrfagos que forman granulomas
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Cinetica de la respuesta
Estadio inicial Atraccin de fagocitos a lugares de replicain bacteriana por citocinas proinflamatorias y citocinas fagocitosis y muerte intracelular
Monocitos se diferencian en DC y producen IL-12 Estadio intermediointervienen NK, y T no convencionales NKT y gd que producen IFNg Tardio clulas T convencionales antigeno especificas expandidas estimulan formacin de granulomas que controlan

Estos clones expandidos son responsables de la memoria inmune

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Citocinas
Reclutamiento leucocitario
Formacin del granuloma

Activacin de macrfagos
Induccin de respuesta protectora de clulas T

Regulacin negativa de la respuesta

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bacterias intracelulares

Inmunidad innata
Fagocitosis Resisten a la fagocitosis Sobreviven en el interior de clulas fagocticas Infeccin crnica y recurrente
Activan a las clulas NK y estas estimulan la produccin de IL-12 (en DC y macrfagos)

Las clulas NK producen IFN-g Activan al macrfago para que destruya las bacterias fagocitadas Proteccin precoz antes de la R. I. adaptativa
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Fagocitos profesionales
Metchnikoff distingui los:
Micrfagos de aparicin temprana y vida corta (granulocitos polimorfonucleares)

Macrofagos de aparicin mas tardia y vida ms larga

Activacin del macrofago esta bajo el control de linfocitos T mediante citocinas IFN y mlculas de membrana
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Granulocitos polimorfonucleares
Importantes en respuesta temprana reducen la carga bacteriana
Ratones deficientes en neutrofilos son susceptibles a Listeria y Salmonella pero no para M t

Elastasa destruye protenas de virulencia de Shigella Salmonela y Yersinia

Acido hipocloroso inactiva los inhibidores de las proteasas y licua tejidos es producido por PNG pero no por MP

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bacterias intracelulares

Respuesta adaptativa
La respuesta especfica principal es la Inmunidad mediada por clulas: Linfocitos Th1, Macrfagos activados y CTL

Muerte de las bacterias fagocitadas

Activacin de macrfagos Dos seales derivadas de clulas T: Membrana: ligando de CD40 (CD40L) Soluble: IFNg

Lisis de las clulas infectadas por linfocitos T CD8+ citotxicos tanto ab (pptidos) como gd (lipopolisacaridos) KO de perforina es susceptible a 33 Listeria.

Repaso presentacin antignica y restriccin de la presentacin

MHC Ia (clsicas) antgenos peptdico citoslicos MHC II antgenos peptdicos vesiculares MHC I like
MHC Ib pptidos con formil metionina CD1 antgenos glicolipdicos
CD1 Tipo 1captan sus ligandos en distintos compartimentos
CD1a superficie celular y fagosoma temprano CD1b en fagosoma tardo y fagolisosoma

CD1c superficie celular y fagosomas en distintos estadios de maduracin

CD1 tipo2
CD1d 34

En la inmunidad contra infecciones por patgenos intracelulares resistentes intervienen distintas poblaciones T

Reconocen ag de distinta naturaleza y de distintos orgenes subcelulares.

Tienen distintas cinticas de activacin unos inmediatas sin expansin clonal: gd, NKT y especificas de N-f-met (no desarrollan memoria) Reconocen ag peptdicos Linfocitos T convencionales ab
CD4 restrictos por MHCII espacio vescular endosoma CD8 citosol

No convencionales Restrictos por MHC1b

Restrictos por CD1 (glicolipicdos endosoma) NKT

No restrictos

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bacterias intracelulares

Inmunidad por linfocitos T convencionales ab CD4 y CD8

CD1 grupo1

DN

Ricketsia Listeria
Presentacin cruzada

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Linfocitos T no convencionales
Clulas CD8 restrictas por MHC de clase Ib que presentan pptidos de protenas N formiladas N-f-met Clulas T ab restrictas por CD1 grupo 1 CD4, CD8 o DN
poblaciones especializadas con especificidad por componente muy abundantes en la pared celular de las mycobacterias. Reconocen LAM y cidos mycolicos cola hidrofbica y parte azucarada polar. Producen IFNg Macrofagos infectados apoptoticos pueden trransferir glicolipidos mycobactria a DC de

Clulas NKT reconocen glicolipidos bacterianos presentados por molculas de CD1 del grupo 2 CD1d

Reconocen Nglicosxil ceramidas de plasmodium y fosfatidil inositol tetramanosido mycobacteriano Estas clulas estn implicadas en la formacin de granulomas Clulas T gd reconocen isopentenilpirofosfato y otros fosfo ligandos independientemente de molculas de presentacin conocidas posiblemente reconocen estas molculas directamente Contribuyen a formacin de granulomas en respuesta
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bacterias intracelulares

Respuesta especfica por linfocitos CD8 citotxicos

Si las bacterias sobreviven en el interior de las clulas Liberan sus antgenos al citoplasma Se presentan asociados a molculas de tipo I Estimulacin de linfocitos T CD8 citotxicos que: Lisan al macrfago y a las bacterias que lo infectan. Producen IFNg que activa la los macrfagos de las proximidades
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bacterias intracelulares

La respuesta inmune a bacterias intracelulares esta

coordinada por linfocitos T CD4 inflamatorios (Th1)

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bacterias intracelulares

Cuando el patgeno intracelular o sus constituyentes no son totalmente eliminados se forman GRANULOMAS
- Centro de macrfagos infectados y clulas gigantes multinucleadas

- Rodeado de clulas T

- Ej: sarcoidosis causada por infeccin

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con

Mycobacterium

tuberculosis

bacterias intracelulares

II.3. Evasin de los mecanismos inmunes

Resistencia a la eliminacin por fagocitosis: Legionella pneumophilla: -Iinhibe fusin de fagolisosomas Listeria monocitogenes: -Produce hemolisina que forma poros en la membrana de fagolisosomas

-Inhibe la presentacin antignica

M. Leprae:

-Inhibe fusin de fagolisosomas

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bacterias intracelulares

II.3. Efectos perjudiciales de la respuesta inmune

Persistencia de la infeccin Estimulacin antignica crnica Activacin de clulas T y macrfagos Los macrfagos activados Producen dao tisular. Hipersensibilidad retardada

Formacin de Granulomas
Localiza la infeccin Evita la diseminacin Produce necrosis y fibrosis Alteracin funcional

La respuesta inmunitaria causa lesin tisular y enfermedad 42

2.4 Evasin de respuesta inmune: diferentes patrones de respuesta producen distintas manifestaciones clnicas
Respuesta Th2 (IL-4) Lepra lepromatosa

bacterias intracelulares

Ttulos elevados de anticuerpos especficos Respuesta celular dbil Proliferacin bacteriana descontrolada en los macrfagos Lesiones destructivas en piel
Respuesta Th1 (IFNg) Lepra tuberculoide

Intensa respuesta celular Niveles bajos de anticuerpos Granulomas alrededor de los nervios Menor nmero de bacterias Neuropata perifrica Menos destruccin tisular

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Endmicos

Hongos

Histoplasma Blastomyces Coccidioides Candida Criptococo Aspergilus

Oportunistas

Pueden vivir: En los tejidos extracelulares Dentro de las clulas Infeccin oportunista en piel o mucosas Menor conocimiento de las respuestas a hongos por la escasez de modelos animales de infeccin fngica 44

Hongos

Inmunidad innata
Los mecanismos de defensa principales son los macrfagos tisulares y los neutrfilos sanguneos
Los pacientes con neutropenia son muy susceptibles a las infecciones fngicas oportunistas.

Liberacin de sustancias fungicidas por neutrfilos (ROI, lisosomas) Fagocitosis

Muerte intracelular

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Hongos

Respuesta especfica
El mecanismo principal es la inmunidad mediada por clulas

Las respuestas: TH1 son protectoras TH2 no son efectivas Anticuerpos no son protectores
Producen lesin granulomatosa
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Ejercicio
En una tabla resumir diferencias entre
infecciones por bacterias Intracelulares y

Extra celulares y en otras las caractersticas

diferenciales de las respuestas inmunes frente a ambos tipos de bacterias

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