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La replicacin es el proceso mediante el cual, a partir de una molcula de DNA doble hlice, se sintetizan dos molculas idnticas. Tiene lugar cada vez que se divide una clula, ya que las dos clulas hijas han de tener exactamente, la misma dotacin gentica que la progenitora.
CARACTERISTICAS Es Semiconservativa Se produce sectorialmente. Es asincrnica Es monofocal en procariotas y multifocal en eucariotas Es Bidireccional Es Semidiscontinua Requiere de Cebadores Ocurre en el perodo S.
Es semiconservativa A partir de la doble hlice de una molcula de DNA se originan dos molculas de DNA, ambas compuestas por una cadena original (preexistente) y una cadena nueva (recin sintetizada). Es decir, que las dos cadenas de la molcula progenitora se separan y sirven cada una de molde para la sntesis de una nueva cadena hija complementaria, siguiendo la regla normal de apareamiento.
La Replicacin es asincrnica
Las bandas R (ricas en G-C) se replican durante la primera mitad de la fase S y las bandas G y Q (ricas en A-T) lo hacen durante la segunda mitad.
Es Bidireccional
Al abrirse la doble hlice se forma una estructura llamada burbuja de replicacin, cuyo tamao aumenta a medida que avanza la separacin de las dos cadenas de DNA, evento que se produce en forma simultnea en los 2 extremos de la burbuja. Cada burbuja, tiene dos horquillas de replicacin que a partir de ese punto de origen comn avanzan en ambas direcciones opuestas y desaparecen cuando colisionan con sus similares de las burbujas contiguas, al culminar el acercamiento progresivo entre ellas.
Origen de replicacin Origen de replicacin
Origen de replicacin
Cadena parental
Cadena hija
Burbuja de replicacin
La otra cadena hija, cuyo molde es la cadena del DNA progenitora que corre en direccin 53 es sintetizada de un modo singular, ya que para poder crecer en esa direccin debe sintetizarse en direccin opuesta al avance de la horquilla de replicacin. El problema se supera haciendo de que la sntesis sea discontinua, lo cual significa que la nueva cadena se sintetiza de a pequeos fragmentos y se le llama cadena retrasada (lagging strand).
La sntesis de la cadena retrasada se lleva a cabo en la direccin opuesta a la del movimiento de la horquilla de crecimiento, a partir de una serie de iniciadores (primers) de RNA cortos formados por la primasa en mltiples sitios de la segunda cadena molde. Los segmentos resultantes de RNA y DNA se conocen como fragmentos de Okazaki.
Es asimtrica
La replicacin es asimtrica, ya que una misma cadena se replica en forma continua de un lado de la burbuja y en forma discontinua del otro lado. Por tanto, cada burbuja presenta cuatro reas generadoras de ADN, dos que lo hacen de manera continua y dos de manera discontinua.
Requiere de Cebadores
Para empezar la sntesis de DNA se requiere una cadena de nucletidos para agregarle un nuevo nucletido. Cada fragmento de Okazaki se inicia con un RNA cebador primer (~10 bases de largo).
REQUERIMIENTOS DE LA REPLICACION
EN PROCARIOTAS DNA Helicasa. Protenas SSB (Single- Strand binding). Topoisomerasas I y II RNA primasa. DNA Polimerasas (DNA Pol) I, II y III Pirofosfatasa. DNA Ligasa DNA molde o template Cebadores Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato: (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) Mg++ Abrazadera EN EUCARIOTAS DNA Helicasa. Protenas SSB (Single- Strand binding). Topoisomerasas I y II RNA primasa. DNA Polimerasas (DNA Pol) , , , , Pirofosfatasa. DNA Ligasa DNA molde o template Cebadores Los 4 desoxirribonucletidos trifosfato: (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) Mg++ PCNA (Proliferating cell nuclear antigen) ORC (origin recognition complex) Nucleasa reparadora
DNA Helicasa
TOPOISOMERASAS
Las Topoisomerasas tipo I relajan el DNA (hacen desaparecer regiones superenrolladas) por corte y cierre de una cadena del DNA.
TOPOISOMERASA II (Girasa)
ETAPAS DE LA REPLICACION
INICIACION
Reconocimiento de orgenes de replicacin Separacin de hebra Posicionamiento de maquinaria de replicacin
ELONGACION
Crecimiento bidireccional de la horquilla de replicacin Replicacin semiconservativa, semidiscontinua, coordinada.
TERMINACION
Reconocimiento de seales de terminacin Desensamble de replisomas
1) INICIACION
La sntesis del DNA se inicia en regiones especiales llamadas orgenes de replicacin. Los orgenes de replicacin tpicamente contienen mltiples secuencias repetidas cortas. Estos segmentos de DNA singulares son reconocidos por protenas multimricas que se unen al origen y, a su vez, reclutan hacia ste otras enzimas de la replicacin.
La iniciacin de la replicacin del DNA en E. coli, se produce por la unin de la protena dnaA (proteina iniciadora) al nico origen de replicacin (oriC), seguida por la fijacin de la DnaB, una helicasa que disocia el DNA a la altura de la horquilla. La asociacin de la primasa (dnaG) a este complejo forma un primosoma. Tras la sntesis del iniciador la primasa se separa.
Debido a su actividad exonucleasa de 5 3, la DNA pol I elimina ribonucletidos a partir del extremo 5 de los fragmentos de Okasaki, y rellena los espacios entre los fragmentos de Okasaki con DNA. Los fragmentos de DNA resultantes son unidos con posterioridad por la DNA ligasa formando una hebra enteramente constituida de DNA
3) TERMINACIN
La replicacin finaliza cuando una horquilla de replicacin se encuentra con el otro lado del cromosoma circular en el lugar de terminacin, la regin ter ( ). La regin ter est formada por un par de secuencias ter de repeticiones invertidas. Cada secuencia ter evita una progresin posterior de una de las horquillas de replicacin cuando se une una protena de unin ter (TBP) de 26 KDa. Las dos molculas hijas de DNA se separan porque acta una topoisomerasa de tipo II.
La capacidad para sintetizar largo DNA es conferido a la DNA Pol- por el antgeno nuclear de clulas en proliferacin (PCNA). El PCNA est formado por 3 subunidades monomricas que forman un aro que se une a la polimerasa y no al DNA para impedir desprendimiento de la enzima ms no su deslizamiento. Los cebadores son eliminados por una nucleasa reparadora y su lugar lo ocupa una pieza equivalente de DNA, sintetizada por la DNAP- . El proceso culmina al actuar la DNA ligasa.