Gentica bacteriana

Dogma Central da Biologia Molecular

DNA Transcriptase reversa transcrio

RNA traduo Protena

Nucleotdeos

Dogma Central da Biologia Molecular

DNA - fita dupla 4 nucleotdeos Adenina -Timina - Citocina -Guanina transcrio RNA - fita simples 4 nucleotdeos Adenina - Uraci l- Citocina - Guanina traduo Protena sequncia de 20 aminocidos

Gregor Mendel Pai da Gentica (1822-1884) (1822Ervilha Pisum sativum 1 lei de Mendel: As caractersticas se segregam Os genes se segregam

Trabalho descoberto no ano 1900

1928 Frederick Griffith Inglaterra S. pneumoniae

Clulas S virulentas vivas

Clulas R avirulentas vivas

Clulas S virulentas mortas pelo calor Clulas R vivas + clulas S virulentas mortas pelo calor

clulas S virulentas vivas

Concluso: Existe um princpio transformante

Evidncias que o DNA o material gentico 1944 O.T Avery, C. M. Mac Leod & M. Mc Carty
Clulas S virulentas mortas

Clulas R avirulentas vivas

clulas S virulentas vivas

Concluso: O DNA o princpio transformante

Aceitao na comunidade cientfica

Dada a complexidade das protenas e a simplicidade da estrutura do DNA composta apenas de 4 nucleotdeos, a maioria dos cientistas estava convencida que os genes deviam ser compostos por protenas. Assim, os resultados de Avery foram ignorados ou atribudos a presena de contaminao do DNA com protenas.

Evidncias sobre a estrutura de DNA

Estudando fotos do DNA atravs de difrao de raios X, Rosalind Franklin foi capaz de mostrar que o DNA seria provavelmente uma hlice com duas ou trs cadeias. Mas seriam duas ou trs as cadeias?

Estrutura de DNA Modelo de Watson & Crick incio dcada 1950

Francis Crick

James Watson

Modelo Watson e Crick - 1953

Sulco maior

Sulco menor

Estrutura de DNA

Duplicao de DNA Conservativa ou semiconservativa? Fita parental Fita filha

1958 - Experincia de Meselson - Stahl A duplicao de DNA semiconservativa

Duplicao de DNA 1963 Cairns Duplicao do cromossomo de E. coli

Microscopia eletrnica de clulas em duplicao com DNA marcado com radioatividade

Duplicao de DNA
1963 Modelo Cairns modelo theta - U (letra grega)

O cromossomo de E. coli circular. Existe uma nica origem de replicao em E. coli.

Genoma Bacteriano
- Conjunto total de genes - organizado em cromossomos

Cromossomo:
- Estruturas contendo DNA, que transportam fisicamente a informao heteditria; - Contm os genes;

Genes
- segmentos de DNA que codificam os produtos funcionais - protenas.
 Gentipo X Fentipo  Gentipo: Composio gentica de um organismo; Propriedades potenciais;  Fentipo: Manifestao do gentipo; Propriedades reais

Informao gentica:
Cromossomo Plasmdeos DNA fgico (fago) Transposons

Genoma Bacteriano
Funes: Codificao de informaes; Variabilidade; Hereditariedade;

Cromossomos:
- fita dupla circular - aproximadamente 4.500 Kb - apresentam informaes essenciais a clula.

Plasmdeos:
- fita dupla circular ou linear - tamanho: 2 a 200 Kb - apresentam informaes adicionais
Fertilidade; Resistncia a antimicrobianos, ons e metais pesados; Produo de bacteriocinas; Produo de toxinas; Utililizao de carboidratos.

 Plasmdeo F : permite trocas genticas por conjugao entre bactrias. Bactria com plasmdeo F faz ponte citoplasmtica (fimbria sexual) com outra bactria e passa uma cpia do plasmdeo. Alguns at se integram ao cromossomo, mas isto muito raro. Se o plasmdeo conseguir se integrar ao

cromossomo haver passagem somente de genes, pois a fimbria sexual logo se quebrar.

 Plasmdeo R : Possui genes que promovem resistncia a antimicrobianos. Age como o plamdeo F.

Plasmdeo

bacteriocinognico

produzem

bacteriocinas que matam outras bactrias. Ex: E.coli - colicina; Pseudomonas - piocinas. Este mecanismo para que as bactria produtoras do plasmdeo bacteriocinognico prevaleam no ambiente.

Transposons:
- pedaos lineares pequenos de DNA que se movem de um stio para outro no DNA celular ou entre o DNA de bactrias, de plasmdeos e de bacterifagos. - So denominados de "genes saltadores". - Incapazes de se duplicar independentemente. - Codificam enzimas relacionadas resistncia a drogas e podem causar mutaes.

Elementos de transposio Segmentos de DNA capazes de se transpor.

Prfago:
so vrus temperados que infectam bactrias, mas que no causam sua lise (morte). Inserem-se no cromossomo ou via plasmdeo e se multiplica normalmente com a bactria.

Colnias - ocorrem o fenmeno do monomorfismo

(mesmas bactrias tm sempre as mesmas caractersticas, j que a reproduo por diviso binria).

Variaes
Variao Fenotpica: ocorrem variaes em funo do meio / ambiente. Assim que o estmulo cessa a bactria retorna ao original. Variaes Genotpicas: evento no reversvel. Pode acontecer pela presena de um plasmdeo, carreando novas caractersticas.

Variao Fenotpica
Exemplo 1: a produo de cpsulas por Klebsiella pneumoniae (bacilo GRAM negativo com cpsula) cessada por falta de acar no meio, mas no param a multiplicao.

 Exemplo 2: raas de Corynibacterium difteriae produzem toxinas o tempo todo, mas em presena de Fe
2+

h inibio.

Exemplo 3: Proteus spp so extremamente mveis (devido aos flagelos), o que dificulta o seu isolamento e posterior estudo. Para resolver tal problema, usa-se formol para inibir o crescimento de flagelo ou usa-se anticorpos contra os flagelos.

Variao Genotpica
Exemplo 1: a resistncia a um antibitico, a partir do momento que a clula ganha um plasmdeo contendo o gene de resistncia a ampicilina. O processo de variao genotpica pode acontecer devido aos diferentes mecanismos de troca gentica das clulas e/ou atravs das mutaes.

Mutaes : alteraes na sequncia de bases nitrogenadas do DNA.

Tipos de mutaes:
- Espontnea - erro de replicao ou transcrio (falha no sistema reparo) - Induzida - ocorre a partir de agentes qumicos, fsicos ou biolgicos.

 Mutaes induzidas podem gerar:

- Mutao positiva: benfica - Mutao negativa: deletria - Silenciosa: sem alterao fenotpica

1) Mutagnicos qumicos Anlogos de base Ex: 5-bromouracil (anlogo de T) Agentes qumicos que reagem com o DNA Ex: cido nitroso (grupos amina grupos hidroxila) Agentes alquilantes Brometo de etdio p Insero entre 2 pb 2) Mutagnicos fsicos Radiaes no ionizantes - UV (formao de dmeros de T)  Radiaes ionizantes - Raio X e gama (quebra da cadeia DNA) 3) Mutagnicos biolgicos - Transposons e Bacterifagos

TROCAS DE MATERIAL GENTICO Variao gentica

Transformao
- Dficil ocorrer in vivo

- Necessrio DNA livre no meio extracelular - DNA faz parte do material gentico da bactria origina outra na reproduo. - Diviso binria - clula nova - clula receptora = estado de competncia.

Estado de competncia

Natural : Streptococcus pneumoniae In vitro : mtodos fsicos (eletroporao, biobalstica)

Transferncia de genes em bactrias

Griffith-1928

1- Transformao

Contato DNA livre clula bacteriana

Principio transformante

1- Transformao

Integrao do DNA no cromossomo bacteriano

Plasmdio livre no citoplasma bacteriano

1- Transformao

 E. coli - Insulina - Bactria recebe pedaos de DNA humano - Gene que produz a insulina - Bactria passa a sintetizar hormnio - Bactrias transgnicas

 E. coli - Mercrio - Bactria recebe pedaos de DNA - Gene especifcos para suportar altas concentraes de mercrio acumulado-o em elevadas taxas (24x mais). - Utilizado para limpar gua contaminada com mercrio.

2- Conjugao Lederberg & Tatum - 1946

auxotrfica

Contato clula clula

auxotrfica

prototrfica

met+ bio+ thr+ leu+

2- Conjugao
Tubo U-Davis
auxotrfica 1 auxotrfica 2

Ausncia de crescimento em meio mnimo Concluso: A presena do filtro inibe a transferncia de material gentico

Contato clula clula

2- Conjugao

Conjugao
A bactria que doa material gentico no sofre modificao, j a receptora sai modificada. Resistncia a vrios antibiticos infeco hospitalar.

2- Conjugao

Contato clula clula

2- Conjugao

Transduo
- Bacterifagos - vrus que infectam bactrias; - Material gentico do vrus no pode promover a destruio da bactria. - Durante a reproduo assexuada, h formao de uma nova linhagem.

Transduo
Ciclo Ltico x Lisognico

yFagos lticos: o Muito agressivos; o Transduo pouco eficiente; yFagos temperados: o Menos agressivos; o Estado de lisogenia (prfago); Ciclo ltico formao da partcula transdutora

Transduo
yPartcula Transdutora (Capsdeo fgico + DNA clivado da bactria) yAltamente especfica yEx.: Corynebacterium diphteriae (gene da toxina diftrica)

3- Transduo
Zinder & Lederberg- 1952
auxotrfica 1 phe+ trp + met- hisauxotrfica 2 phe- trp - met+ his+

cepa 2 prototrfica phe+ trp+ met + his +

Ausncia de crescimento em meio mnimo

Presena de crescimento em meio mnimo

Concluso: um agente filtrvel seria responsvel pelo aparecimento dos microrganismos prototrficos da cepa 2.

3- Transduo
fago

fagos
Fago contendo genes bacterianos