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P RACTICA 5.

L A ACCIN DE LAS ENZIMAS

Las enzimas aceleran la V de las reacciones debido a que actan como catalizadores al disminuir la energa de activacin de las sustancias reaccionantes.

En toda reaccin enzimtica intervienen dos elementos: por una parte, la enzima; por otra, el sustrato (sustancia o sustancias que, mediante una reaccin catalizada por la enzima, se transformarn en otro producto o productos).

Cuando se forman los productos de la reaccin se regenera el catalizador (enzima) libre.

LA

CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones qumicas que son catalizadas por las enzimas. las reacciones catalizadas por enzimas son saturables, la velocidad de catlisis no muestra un comportamiento lineal en una grfica al aumentar la concentracin de sustrato. la velocidad de la reaccin (representado como V) aumenta linealmente con el aumento de la [E], como se puede ver en la figura. Sin embargo, cuando aumentamos la [S], la enzima se satura de sustrato y alcanza su velocidad mxima (Vmax), que no se sobrepasar en ningn caso, independientemente de la [S].

Velocidad inicial

Concentracin de enzima

Para cada enzima hay una concentracin de sustrato caracterstica Km a la que la velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima La relacin cuantitativa entre la velocidad inicial de la reaccin la concentracin del sustrato Km y la velocidad mxima de una enzima vienen dadas por la ecuacin de Michaelis-Menten

Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen a enzimas y disminuyen su actividad.

PARA QUE SIRVEN LOS INHIBIDORES ENZIMTICOS ?

Su actividad anti enzimtica tiene diferentes funciones en los organismos que las contienen ejemplo:

sistemas de defensa contra hongos al inhibir sus sistemas enzimticos

Tambin existen diferentes medicamentos que funcionan como inhibidores enzimticos

La capacidad de la aspirina de suprimir la produccin de prostaglandinas (mensajeros del dolor) y tromboxanos se debe a la inactivacin irreversible de la ciclooxigenasa.

S U UTILIDAD EN LA CIENCIA

A partir del estudio de los inhibidores de las enzimas se ha obtenido informacin importante de:

la especificad de las encimas la naturaleza qumica de los grupos funcionales del sitio activo del mecanismo de la actividad cataltica Rutas metablicas de la clula.

T IPOS DE INHIBICIN
ENZIMTICA

Reversible
o

Irreversible
o Progresiva con el tiempo o Efectividad dada por la velocidad de inhibicin

Se llega a un equilibrio La efectividad del inhibidor esta en funcin de Ki Independiente del tiempo

T IPOS DE INHIBICIN
REVERSIBLE

De acuerdo a las caractersticas del efecto que tiene el inhibidor en la actividad enzimtica los inhibidores reversibles se clasifican en:

Competitivos Acompetitivos No competitivos

I NHIBICIN

COMPETITIVA

En la inhibicin competitiva el inhibidor puede combinarse con la enzima libre de tal modo que compite con el sustrato normal para unirse al centro activo.

D ETALLES DE LA INHIBICIN
COMPETITIVO

Un inhibidor competitivo reacciona reversiblemente con la enzima para formar un complejo enzima inhibidor anlogo al complejo enzima sustrato. La molcula del inhibidor no qumicamente alterada por la enzima resulta

En este tipo de inhibicin la constante de inhibicin es igual a la constante de disociacin del complejo enzima inhibidor

La inhibicin competitiva no disminuye la velocidad mxima de la enzima sino que aumentan el Km

El porcentaje de inhibicin para una concentracin de inhibicin constante disminuye al aumentarse la concentracin del sustrato

I NHIBICIN NO COMPETITIVA ( ALOSTERICA )

Un inhibidor no competitivo puede combinarse tanto con la enzima libre como con el complejo enzima sustrato interfiriendo con la actividad de ambos. Para este tipo de inhibicin existen dos constantes del inhibidor

C ARACTERSTICAS DE LA
INHIBICIN NO COMPETITIVA

Los inhibidores no competitivos se unen a un centro de la enzima distinto al del centro activo a menudo para deformar la enzima de manera que no se pueda formar el complejo enzima sustrato a su velocidad normal y que una vez formado no se descomponga a su velocidad habitual para liberar los productos de reaccin .

Sus efectos no se anulan al aumentar la concentracin del sustrato

En la inhibicin no competitiva la reaccin con el inhibidor produce dos formas inactivas EI y ESI
En la inhibicin no competitiva la Vmax decrece en presencia del inhibidor y no puede restablecerse su valor aun se aumente la concentracin de sustrato

A diferentes concentraciones de inhibidor en la grafica 1/Vo contra 1/(S) las pendientes de rectas difieren (aumentan conforme aumenta la concentracin del inhibidor)

I NHIBICIN

ACOMPETETIVA

En este tipo de inhibicion el inhibidor nos se combina con la enzima libre ni afecta a su reaccion con el sustrato normal sino que se se combina con el complejo enzima sustrato para formar el complejo ESI el cual no recaciona

En estas reacciones el grado de inhibicin aumenta cuando la concentracin de sustrato se ve aumentada.

En este tipo de inhibicin la constante de inhibicin es

Lo caracterstico de la inhibicin acompetativa es que la pendiente de las rectas permanece constante al aumentar la concentracin del inhibidor pero la V max decrece.

C OMPARACIN DE LOS TIPOS


DE INHIBIDORES REVERSIBLES

Si solo afecta el Km - competitiva Si solo afecta Vmax -no competitiva Si afecta tanto Km como- Vmax acompetitiva

T RABAJO

DE LABORATORIO

Durante las practicas de laboratorio utilizamos como enzima a la sacarasa la cual es una enzima que convierte la azcar comn (sacarosa) en fructuosa y glucosa

0.00045 0.0004 0.00035 Velocidad de reccion Ui

0.0003
0.00025 0.0002 0.00015 0.0001 0.00005 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 Concentracon de sustrato 0.25 0.3

El inhibidor utilizado durante la practica fue la anilina La grafica obtenida experimentalmente fue la siguiente

Sin inhibidor Con inhibidor