Identificacin bacteriana

Conjunto de tcnicas y procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo. Se utilizan en:

En el rea clnica En la industria farmacutica, cosmtica y de alimentos En investigacin bsica

Clasificacin de los mtodos de identificacin bacteriana

Mtodos basados morfolgicos Mtodos basados Mtodos basados Mtodos basados Mtodos basados Mtodos basados

en criterios
en en en en en tincin diferencial pruebas bioqumicas tipificacin con fagos pruebas serolgicas deteccin molecular

Medio de cultivo
Los medios de cultivo deben contener los elementos nutritivos necesarios para permitir la multiplicacin de las bacterias

Clasificacin de acuerdo a su composicin:

Bsicos Enriquecidos Selectivos Selectivos-Diferenciales

Medios de cultivo cromognicos

Medio selectivodiferencial preparado con sustancias cromognicas.

Productos qumicos de sntesis que son incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces que al ser hidrolizados por enzimas bacterianas especificas se libera produciendo un color intenso.

Ventajas:
Galactosa ONF (incoloro)

Fcil y rpida interpretacin por su coloracin especifica y morfologa.

-galactosidasa

Resultados
fiables.

seguros

y en

Galactosa + ONF (amarillo)

Diferenciacin cultivos mixtos

Menor tiempo en la identificacin presuntiva (18-24 hrs).

Reduce

gastos material y reactivos.

de

Desventaja:

No hay un medio de cultivo para cada microorganismo, solo para algunos

Medios cromognicos para el aislamiento y recuento de microorganismos causantes de infecciones urinarias:

CHROMagar
Orientation

URI Select 4 Agar CPS-ID3 Chromogenic UTI

CHROMagar Candida Cromogen albicans Candida ID Albicans ID2 CandiSelect Fluoroplate Candida Agar SDCA - MUAG

Frmula:

Cromopeptona 10g Glucosa 20g Mezcla cromgena 2g Cloranfenicol 0,5g Agar 15g Agua purificada 1000mL pH 6,0 0,3

 X-glucsido sustrato

para la deteccin de la enzima -glucosidasa, comn a las especies de Listeria.

Un sustrato (L--

fosphatidylinositol) para una enzima fosfolipasa C que est presente en Listeria monocytogenes.

 Coliformes: enzima -D-galactosidasa, que rompe el sustrato Salmon-GAL, provocando la aparicin de colonias de color salmn a rojo.

El sustrato X-glucuronido, es usado para la deteccin de la -D-glucoronidasa, enzima caracterstico de E.coli, (a excepcin de E.coli 0157:H7) y produce una coloracin azul de las colonias positivas. E.coli, al romper tanto Salmon-GAL como Xglucuronido, generan colonias de color azul oscuro a violaceas.

Agar cromognico para Salmonella sp.

El sustrato Magentacaprilate es hidrolizado por la Salmonella lactosa negativa. El sustrato X-Gal es escindido por el enzima -D galactosidasa.

Diseados para realizar varias pruebas bioqumicas simultneamente y permitir la identificacin en un tiempo ms corto.
Microorganismos: Bacterias Levaduras

Caractersticas:

Pocillos de plstico Mnima cantidad de medio o de sustrato (liofilizado o desecado) Inoculacin directa del medio (rehidratacin del sustrato) Entre 10 y 50 pruebas

Manipulacin y lectura siguiendo instrucciones del fabricante

Posibilidad de identificar enterobacterias, bacilos gram negativos no fermentadores, estafilococos, estreptococos, corineformes, bacterias anaerobias y levaduras.

Consta de tubos miniaturizados que contienen el medio de cultivo que se hidratan al inocularlos con la suspensin bacteriana pura.

Las pruebas se clasifican en grupos; a c/u de los ensayos con resultados positivos se les asigna un determinado valor numrico.
Obtenindose un cdigo que corresponder a un determinado gnero o especie en un texto de la base de datos.

Sistemas comerciales
Manuales Automatizados
Sistema ATB (API automatizado)

Becton Dickinson Diagnostics Enterotubo

API

Abactor II

RapID ONE

Vitek

BD Phoenix

Ventajas de sistemas manuales

Fiabilidad semejante a pruebas
convencionales Ocupan poco espacio (incubacin y almacenamiento) Larga duracin (caducidad: 6-12 meses) Manejo sencillo Fcil inoculacin Fcil interpretacin de resultados Pruebas y medios uniformes

Caractersticas:

Tubo de polipropileno (forma de lpiz) 12 compartimentos 12 medios de cultivo diferentes (pruebas bioqumicas) 15 resultados posibles

Manejo

Lectura e interpretacin de resultados

Lectura de las pruebas:

Agrupar las pruebas de tres en tres
negativas (todas valen 0) Positivas: primera del triplete vale 4 segunda vale 2 tercera vale 1

Obtencin del nmero de biotipo (5 dgitos) Comprobar identificacin con ENCISE (Enterobacteriaceae

Numerical Coding and Identification System) (registro de perfiles)

Caractersticas:

Tiras de plstico con 20 minitubos Orificio en parte superior (inoculacin) Contienen sustratos deshidratados de 20 pruebas bioqumicas Aadir 5 mL de agua a la bandeja para mantener la hidratacin Necesaria suspensin bacteriana (Agua destilada o SSE NaCl al 0.85%)

Tipos

API 20E: Enterobacteriaceae

API STAPH

API 20 STREP

Levaduras
Suspensin en 2 ml de agua destilada estril hasta obtener una turbidez igual a 2 de McFarland. Incubar a 30 C durante 48-72 h.

Manejo

Indicaciones:
Sin sealacin: llenar solo el tubo
Indicados con subrayado: llenar con aceite estril la cpula Indicados con : Se llena tubo y cpula

Lectura e interpretacin de los resultados

Agrupar las pruebas de tres en tres Negativas (todas valen 0) Positivas : Primera del triplete vale 1 Segunda vale 2 Tercera vale 4

Transformacin de las 20 pruebas en cdigo de 7 dgitos (nmero de biotipo)

Tarjeta de resultados

Sistema Uni-Yeast-Tek (Candida)

Constituido por:

Una placa plstica con mltiples compartimentos Contienen un medio con agar para la asimilacin diferencial de siete hidratos de carbono. Tambin incorpora una cubeta central con agar harina de maz-Tween 80 para determinar el crecimiento micelial y la produccin de clamidosporas.

Adems, est provisto de agar urea, agar para la asimilacin y reduccin de nitratos. Un caldo con extracto de carne al 2,6% (con 0,05% de glucosa) para realizar la prueba del tubo germinal.

Galera ID 32C

Permite identificar 63 especies Puede ser utilizada manualmente o bien de forma automatizada mediante los sistemas ATB Expression o mini API.

La galera se compone de 32 cpulas: 29 contienen cada una un sustrato carbonado deshidratado Una es el control negativo Otra detecta la sensibilidad a la cicloheximida La ltima es una prueba colorimtrica para la esculina.

Ventajas de los sistemas automatizados

Estandarizacin de los procesos Requieren un proceso de inoculacin e incubacin cortos Rapidez de respuesta 6-18 hrs Adecuacin a la diversidad de agentes de importancia clnica Objetividad de las determinaciones Precisin y reproducibilidad de los resultados Bioseguridad Optimizan el tiempo el personal de laboratorio Aumenta el control de las variables

Desventajas

Alto costo No incluyen caractersticas esenciales de ciertas especies No esta disponible para todo el espectro de bacterias Necesidad de cultivo puro Paneles no definidos por el usuario

Bacterias gramnegativas, gramnegativas urinarias, estafilococos y estreptococos

Manejo

Tarjeta de lectura
I. Exacta

I. Probable

Permite identificacin de bacterias gramnegativas y grampositivas incluyendo patgenos de orina, patgenos entricos, levaduras, anaerobios, Neisseria y Haemophilus

Tarjetas

Son de plstico transparente

Manejo

BD PHOENIX

Diseado para la identificacin rpida y la prueba de sensibilidad a antibiticos Bacterias aerobias grampositivas asi como aerobias y anaerobias facultativas gramnegativas Incluye pruebas para la fermentacin, oxidacin, degradacin e hidrlisis de diversos sustratos as como diversos antibiticos

Se inocula con una solucin al 0.5 de McFarland Analiza los paneles cada 20 minutos hasta un mximo de 16 hrs.

Referencias bibliogrficas

www.quimibell.com.mx www.biomerieux.com.mx

Rodrguez CE. Bacteriologa General: Principios y prcticas de laboratorio. Costa Rica: Editorial Universidad. 2005 Prats G. Microbiologa Clnica. Madrid: Mdica Panamericana. 2005