UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA PROFESOR: Ing. Javier Javier Alba Botryosphaeria viticola sp.

En vides: Con una especie nueva Dothiorella anamorfa ALUMNO: Victor Hugo Febre Calle

INTRODUCCION
----------------------------------------------------------------------------------------------------Las especies de Botryosphaeria . Son muy conocidas como agentes patgenos, saprfitos y endfitos en una amplia gama de angiospermas leosas y anfitriones gimnospermas.

El genero Dothiorella fue resucitado para dar cabida a anamorfos de la especies de Botryosphaeria con conidias que se vuelven de colores y septadas en una fase temprana de desarrollo, incluso antes que sean liberados de las clulas conidiogenas

 Esto contrasta con las conidias de las especies de Diplodia, las

cuales son hialinos y se vuelven oscuras y septadas poco tiempo despues que se forman, normalmente despues de un periodo de envejecimiento, una vez que son descargados de los picnidios.
Otra de las caracteristicas morfolicas distintivas en sus ascosporas

color marron, mono septadas. Aunque la mayoria de las especies ascosporas de Botryosphaeria ocasionalmente se sabe que se vuelven marrones claro y mono septadas con la edad. Ascosporas de las especies hasta ahora reportados con anamorfos Dothiorella se vuelven intensamente marrn en una fase temprana de desarrollo.

OBJETIVO
El objetivo de este estudio fue caracterizar la morfologia de este

hongo y determinar su relacin filogentica Bothyosphaeria con otras especies.

MATERIALES Y METODOS
--------------------------------------------------------------------------------------Aislamiento y la morfologa:
Aislamiento de conidias individuales, ascosporas individuales o por revestimiento de trozos de tejidos enfermo despus de la esterilizacin de la superficie en etanol al 70% durante 4min. Se cultivaron aislaciones en dextrosa agar de papa- Difco(PDA).

pedazos de tallos de vid autoclave a 25C fotoperiodo de 12/12 horas.

Incubadas en la OSCURIDAD EN INTERVALOS DE 5 C.

.

 Las muestras fueron presentadas con el herbario de la Estacion Agronomica

Nacional

Los examenes se realizaron con un microscopio Leica eqiupado con optica Nomarski DIC.

TABLA I: AISLADOS INCLUIDOS EN ESTE ESTUDIO

Secuencia del ADN

El ADN fue extraido del micelio del hongo descrito por Alves. Cada reaccion contenia 0,5 ml del ADN patron (de aproximadamente 100mg de ADN genomico), 20 ml de Eppendorf Mastermix 2.5 (Eppendorf AG, Hamburgo), 0,4 ml de cada cebador y hecho hasta un volumen final de 50mL. Perfiles de temperaturas se utilizaron:un ciclo de desnaturalizacin inicial a 95C durante 3 min, seguido de 35 ciclos de desnaturalizacin (20s a 95 C ), reconocido (30s, a 55 C para ITS o 58 C) de extensin (40s a 72 C ), con una extensin final a 72C durante 5min. Los productos PCR se purificaron con el Kit de Alta Purificacin de Producto PCR. Los fragmentos resultantes se analizaron en un secuenciado automtico de ADN. Todas la secuencias se revisaron naturalmente y los arreglos de nucleotico en posiciones ambiguas fueron aclaradas con las secuencias de ambas cadenas.

RESULTADOS ------------------------------------------------------------------------Analisis filogenetico:

ITS y EF1- secuencias se reunieron con 37 otros recuperadores de GenBank, Se representan 14 especies de Botryosphaeria y dos grupos de especies (Cercospora APII Fresen. Y una especie de la Hypocreales ). Una extensa bsqueda de ITS y EF1- en GenBank no revelo ninguna alternativa adecuada afuera. Las secuencias fueron alinadas con Clustal X y manual de los ajustes cuando sea necesario.

Antiguamente las regiones alineadas y los caracteres indel asociados fueron excluidos del anlisis. Los anlisis filogeneticos: uniones semejantes y maxima parsimonia. Todos los caracteres fueron desordenados y de igual peso . Las ramas de longitud cero fueron derrumbadas y todos los arboles multiples, igualmente parsimoniosos se conservaron. la Estabilidad de rangos en arboles se evalu con 1000 repeticiones de arranque.

Morfologia:
Tallos podados desechados se recogieron de cinco viedos en el NE de Espaa dio picnidos de un coelomycete con los caracteres correspondientes a Dothiorella. Y uno de ellos llevaba una ascomiceto con ascas Bitunicante con ocho ascosporas mono septadas . El cultivo obtenido de una ascopora de esta coleccin mas reciente produjo picnidos y conidios que fueron indistinguibles con el coelomycete arriba citado, confirmado as la coneccin entre el anamorfo y telemorfo. Otra coleccin se obtubo un fragmento de madera de necrosis. Ascosmas fueron encontradas raramente. Que contenia 8ascosporas a menudo tenian una pequea protuberancia en uno o ambos extremos. Las conidiomas fueron erumpentes a travs de la corteza base. Los conidiogenesis y conidios se obsrvaron en picnidos ya sea de tallos o los obtenidos en los cultivos que fueron similares a los descritos para Botryosphaeria iberica y sarmentorum. Los condiogenesis eran holoblasticas , con poliferacion de celulas conidiogenas al mismo nivel dando lugar a engrosamientos periclinales o proliferacion de percurrelntly para formar uno o dos annellations. Los Conidios eran marrones, con paredes gruesas y mono septadas con ambos extremos redondeados o aveces con una base truncada . Las conidias se hicieron de color marron y mono septadas en una fase temprana, incluso antes de que fueran liberados de las clulas conidiogenas.

TAXONOMIA
. Basndose tanto en datos morfologicos y filogeneticos de los hongos estudiados
hasta aqu se considera que pertenecen al genero Botryosphaeria. Debido a que es morfolgica y filogenticamente distinto de otras especies conocidas en el gnero, es descrito como una nueva especie de B. viticola. . El teleomorfo parece ser poco comn, y por esta razn creemos es importante aplicar un nombre al amorfo.

DISCUCIN
En este estudio la viticola Botryosphaeria se describe como una nueva especie. Est estrechamente relacionada con B. sarmentorun y B. ibrica, de acuerdo con los datos morfolgicos y secuencias de ADN de las its y las regiones del gen EF1-. Las ascosporas con de estas tres especies son de color marrn y mono septadas, que contrasta con la hialina y ascoporas aseptadas comnmente considerada como tpico de Botryosphaeria basado en B. dothidea teniendo a Fusicoccum anamorfo segn lo explicado por phillips. por otra parte B. laricis y B. viscise estn reportados por tener ascoporas marrones y mono septadas. Sin embargo B.viticola , B. sarmentorum y B. iberica son inusuales en que sus ascoporas que se vuelven de color marrn y septan tempranamente en su desarrollo. Estas caracteristicas de las ascoporas podra poner a estas tres especies en Dothidotthia hhn. Barr consider que la nica diferencia entre Botryosphaeria y Dothidotthia es que mientras en Dothidotthia las ascoporas son de color marrn y septadas en Botryosphaeria son hialinos y aseptadas.

A nuestro conocimiento Botryosphaeria viticola es la tercera especie conocida, junto con B. iberica y B. sarmentorum con anamorfos en Dothiorella (difiere de Diplodia en las caracteristicas morfologicas y moleculares). Las conidias de Dothiorella se vuelven marrones y septadas en una fase temprana, incluso antes de la dehiscencia de las clulas conidigenas, mientrasque las conidias en Diplodia son hialinas y se vuelven oscuras y septadas con la edad.

El anlisis filogentico de nuestro estudio mostr claramente que dos aislamientos de este Diplodia sp. Agrupado con otros aslamientos de B. viticola, sustenta la identificacin de este hongo como B. viticola. El caso conocido de B. viticola en Espaa y sudfrica sugerira que esta especie puede ser ampliamente distribuida, posiblemente dondequiera que se cultiva la vid. B. viticola parece ser un saprfito, de acuerdo con los resultados obtenidos en las diferentes pruebas de patogenicidad con la cepa.

B. Viticola se a encontrado principalmente en viejos tallos podados , desechados y no se ha asociado sntomas de cualquier enfermedad, lo que refuerza la idea de que podra ser una especie saprfita.

B. Viticola, esta estrechamente relacionada con otras especies del genero Bothyosphaeria, es decir tiene caractersticas similares. Pero se ha demostrado mediante el presente estudio que se trata de una nueva especie.