Aminocidos y Pptidos

Aminocidos Anlisis de Pptidos

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Sntesis de Pptidos

AMINOCIDOS Y PPTIDOS

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Pedro Antonio Garca Ruiz

Catedrtico de Escuela Universitaria Area Qumica analtica Profesor Titular de Universidad Area Qumica Orgnica

Departamento de Qumica Orgnica - Universidad de Murcia

Aminocidos y Pptidos
Aminocidos Anlisis de Pptidos
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Sntesis de Pptidos

Aminocidos
Propiedades inicas Identificacin de aminocidos
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Reacciones de los aminocidos

Produccin de aminocidos

Aminocidos
Name Alanine Arginine Asparagine Aspartic acid Cysteine Glutamine Glutamic acid Glycine Histidine Mass(-H2O) Side Chain Occurrence (%) 71.079 CH37.49 156.188 HN=C(NH2)-NH-(CH2)35.22 114.104 H2N-CO-CH24.53 115.089 HOOC-CH25.22 103.145 HS-CH21.82 128.131 H2N-CO-(CH2)24.11 129.116 HOOC-(CH2)26.26 57.052 H7.10 137.141 N=CH-NH-CH=C-CH2- 2.23 |______________| Isoleucine I, Ile 113.160 CH3-CH2-CH(CH3)5.45 Leucine L, Leu 113.160 (CH3)2-CH-CH29.06 Lysine K, Lys 128.17 H2N-(CH2)45.82 Methionine CH3-S-(CH2)2HagaM, Met modificar el estilo de subttulo del patrn2.27 clic para 131.199 Phenylalanin eF, Phe 147.177 Phenyl-CH23.91 Proline P, Pro 97.117 -N-(CH2)3-CH5.12 |_________| Serine S, Ser 87.078 HO-CH27.34 Threonine T, Thr 101.105 CH3-CH(OH)5.96 Tryptophan W, Trp 186.213 Phenyl-NH-CH=C-CH2- 1.32 |_____________| Tyrosine Y, Tyr 163.176 4-OH-Phenyl-CH23.25 Valine V, Val 99.133 CH3-CH(CH2)6.48 Symbol A, Ala R, Arg N, Asn D, Asp C, Cys Q, Gln E, Glu G, Gly H, His

Punto isoelctrico

Aminocidos
H 3O H 3O H 3N CH COO HO R HO H 2N CH COO R

H 3N CH COOH R

pH en el punto isoelctrico = pI = (pk1+pk2) Asprtico, glutmico, tirosina, phidroxifenilalanina, cisteina

Dos grupos cidos Tres pk

pI = (pk1+pk2) Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn Lisina, arginina Dos grupos amino

H3N CH COOH (CH2)3 COOH

H 3O HO k1

H3N CH COO (CH2)3 COOH

H 3O HO k2

H3N CH COO (CH2)3 COO

H 3O HO k3

H2N CH COO (CH 2)3 COO

Punto isoelctrico

Aminocidos
H 3O H 3O H 3N CH COO HO R HO H 2N CH COO R

H 3N CH COOH R

pH en el punto isoelctrico = pI = (pk1+pk2) Asprtico, glutmico, tirosina, phidroxifenilalanina, cisteina

Dos grupos cidos Tres pk

pI = (pk1+pk2) Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn Lisina, arginina Dos grupos amino pI = (pk2+pk3)

H3N CH COOH (CH2)4 NH3

H 3O HO

H3N CH COO (CH2)4 NH3

H3O HO

H2N CH COO (CH2)4 NH3

H 3O HO

H2N CH COO (CH2)4 NH2

k1

k2

k3

R =H

Glicina Smbolo: G, Gly pK1=2,34 pK2=9,60

R hidrfobo

Alanina Smbolo: A, Ala

CH3
CH NH2 C O OH

H
CH NH2 C O OH

pK1=2,34 pK2=9,69 pI=6,00

pI=5,97

Abundancia: 7.10

Abundancia: 7.49

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R polar (+) a pH=7

NH C NH2 NH CH2 CH2 CH2

Arginina

R polar

Asparragina Smbolo: N, Asn pK1=2,02 pK2=8,80 pI=5,41

Smbolo: R, Arg pK1=2,17 pK2=9,04 pK3=12,48 pI=10,76

O C NH2 CH2

CH NH2 C O OH

CH NH2 C O Abundancia: 5.22 OH

Abundancia: 4.53

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R polar (-) a pH=7

cido asprtico Smbolo: D, Asp

R polar (-) a pH=5

Cisteina Smbolo: C, Cys

COOH CH2
CH NH2

pK1=1,88 pK2=3,65 pK3=9,60 pI=2,77

SH CH2
CH NH2 C O OH
Abundancia: 1.82 pK1=1,96 pK2=8,18 pK3=10,28 pI=5,07

C O Abundancia: 5.22 OH

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R polar

Glutamina Smbolo: Q, Gln pK1=2,17 pK2=9,13 pI=5,65

R polar(-) a pH=7

cido glutmico Smbolo: E, Glu pK1=2,19 pK2=4,25 pK3=9,67 pI=3,22 Abundancia: 6.26

O C NH2 CH2 CH2

CH NH2 C O OH

O C OH CH2 CH2

CH NH2 C O OH

Abundancia: 4.11

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R polar (+) a pH=7

Histidina Smbolo: H, His

R hidrfobo

Isoleucina Smbolo: I, Ile

CH3 CH2 CH CH3

N NH
CH NH2 C O OH

pK1=1,82 pK2=6,00 pK3=9,17 pI=7,59

pK1=2,36 pK2=9,68 pI=6,

CH NH2 C O OH

Abundancia: 2.23

Abundancia: 5.45

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R hidrfobo

Leucina Smbolo: L, Leu

R polar (+) a pH=7

Lisina Smbolo: K, Lys pK1=2,18 pK2=8,95 pK3=10,53 pI=9,74

CH3 CH CH2
CH NH2 C O OH

CH3

pK1=2,36 pK2=9,60 pI=5,98

NH2 CH2 CH2 CH2 CH2

CH NH2 C O OH
Abundancia: 5.82

Abundancia: 9,06

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R hidrfobo

Metionina Smbolo: M, Met pK1=2,28 pK2=9,21 pI=5,74

R hidrfobo

Fenil alanina Smbolo: eF, Phe pK1=1,83 pK2=9,13

CH3 S CH2 CH2

CH NH2 C O OH

CH2
CH NH2 C O OH

pI=5,48

Abundancia: 2,27

Abundancia: 3,91

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R hidrfobo

Prolina Smbolo: P, Pro pK1=1,99 pK2=10,60

R polar

Serina Smbolo: S, Ser

OH CH2
CH NH2 C O OH

pK1=2,21 pK2=9,15 pI=5,68

CH2 CH2

pI=6,30

CH NH C O OH
Abundancia: 5,12

Abundancia: 7,34

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R polar

Treonina Smbolo: T, Thr pK1=2,09 pK2=9,10 pI=5,60

R hidrfobo
NH

Triptofano Smbolo: W, Trp pK1=2,83 pK2=9,39

CH3 CH OH
CH NH2 C O OH

CH NH2 C O OH

pI=5,89

Abundancia: 5,96

Abundancia: 1.32

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R polar (-) a pH=5

Tirosina

R hidrfobo

Valina Smbolo: V, Val pK1=2,32 pK2=9,62 pI=5,96

OH

Smbolo: Y, Tyr pK1=2,20 pK2=9,11 pK3=10,07 pI=5,66

CH3 CH3 CH
CH NH2 C O OH

CH NH2 C O OH
Abundancia: 3.25

Abundancia: 6.48

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Aminocidos
Propiedades inicas Identificacin de aminocidos
Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Reacciones de los aminocidos

Produccin de aminocidos

Identificacin de aminocidos

Extraccin de aminocidos libres Determinacin de aminocidos libres totales Separacin de aminocidos Tcnicas espectroscpicas Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Disolventes Purificacin

Identificacin de aminocidos

Extraccin de aminocidos libres Determinacin de aminocidos libres totales Separacin de aminocidos Tcnicas espectroscpicas Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Mtodo del N-formol Mtodo del cido nitroso Mtodo de la ninhidrina

Mtodo del N-formol Para formar la imina y bloquear el grupo amino

C O + H2N CH COOH H R

H C N CH COOH H R

Desaparece el carcter anftero del aminocido y puede valorarse con NaOH Haga clic y fenolftaleina. para modificar el estilo de subttulo del patrn

Este mtodo de valoracin de aminocidos libres totales se emplea para valorarlos en piensos, hidrolizados de protenas y lquidos biolgicos

Identificacin de aminocidos

Extraccin de aminocidos libres Determinacin de aminocidos libres totales Separacin de aminocidos Tcnicas espectroscpicas Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Mtodo del N-formol Mtodo del cido nitroso Mtodo de la ninhidrina

Mtodo del cido nitroso Con cido nitroso los aminocidos desprenden nitrgeno

HO N

O + H2N

CH COOH R

HO N

CH COOH R

N2 +

HO

CH COOH

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn R

La medida del volumen de nitrgeno desprendido permite calcular la cantidad de aminocidos totales.

Identificacin de aminocidos

Extraccin de aminocidos libres Determinacin de aminocidos libres totales Separacin de aminocidos Tcnicas espectroscpicas Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Mtodo del N-formol Mtodo del cido nitroso Mtodo de la ninhidrina

Mtodo de la ninhidrina Hidratode triceto hidrindeno Los aminocidos dan color azul-violeta con la ninhidrina
O OH OH O O O O + H2N CH COOH R

Cualquier CO aminocido al O O reaccionar O H CH origina el N N CH patrn Haga clic para R modificar el estilo de subttulo del COOH mismo producto de R reduccin de la O O ninhidrina CO O O O O H CH H H2O CH NH2 R N R
O

Mtodo de la ninhidrina Hidratode triceto hidrindeno Los aminocidos dan color azul-violeta con la ninhidrina
O H NH2 O O

+ O
O

Cualquier aminocido da el aducto azul violeta

O H O

H N Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn O O

O

N O

Cualquier aminocido al reaccionar origina el mismo producto de reduccin de la ninhidrina

Identificacin de aminocidos

Extraccin de aminocidos libres Determinacin de aminocidos libres totales Separacin de aminocidos Tcnicas espectroscpicas Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

G.L.C.-M.S. H.P.L.C.-UV (I.R.) H.P.L.C. Otras

Identificacin de aminocidos

Extraccin de aminocidos libres Determinacin de aminocidos libres totales Separacin de aminocidos Tcnicas espectroscpicas Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R.M.N. O.R.D.-C.D. Otras

Aminocidos
Propiedades inicas Identificacin de aminocidos
Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Reacciones de los aminocidos

Produccin de aminocidos

Reacciones de los aminocidos

Esteres metlicos y etlicos Esteres benclicos Formacin de amidas

Suspensin el el alcohol con HCl anhidro del aminocido. El ester se asla por cristalizacin como clorhidrato

CH 2 CH
Fenil alanina

COO Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn CH OH

3

CH 2 CH

CO OCH 3 Cl

NH 3

HCl

NH3
90%

Reacciones de los aminocidos

Esteres metlicos y etlicos Esteres benclicos Formacin de amidas

Alcohol benclico con bencenosulfonato o tosilato como catalizador. El agua se elimina por destilacin azeotrpica

Haga 2OH CH clic para modificar el estilo de H SO3 subttulo del patrn

H3N CH2 COO

Glicina

SO3 H3N CH2 CO O CH2

90%

Reacciones de los aminocidos

Esteres metlicos y etlicos Esteres benclicos Formacin de amidas Los esteres bencilicos como grupos protectores de fcil eliminacin.

Cl

Haga clic CO O CH H3N CH2para modificar el2estilo de subttulo del patrn

H2/Pd
CH3

Cl

H3N CH2

COOH

Reacciones de los aminocidos

Esteres metlicos y etlicos Esteres benclicos Formacin de amidas

Preferentemente en medio bsico y con cloruros de cido. Por ejemplo cloruro de benzoilo y sosa concentrada en agua.

4C HO Haga H 3N CH COO clic para modificar el estilo de subttulo del patrn CO HN CH COO COCl 2h H 2O CH CH 3 CH3 CH CH 3 CH3

CO HN CH COOH CH3 CH CH3

HCl

Reacciones de los aminocidos

Esteres metlicos y etlicos Esteres benclicos Formacin de amidas Tambin por reaccin con anhdrido actico

H 3N

CH3 Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn 100C CH 2 CH3 C O C CH3
CH COO NH

C HN CH COOH O CH2 NH N

2h

80%

Histidina

Aminocidos
Propiedades inicas Identificacin de aminocidos
Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Reacciones de los aminocidos

Produccin de aminocidos

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

cido glutmico -350.000 ton/ao Metionina -120.000 ton/ao Lisina -35.000 ton/ao

Otros entre 50 y 500 ton/ao

Produccin industrial Aminocido Alanina valina leucina L 14.00 13.25 8.25 D

Precios en 1983 en $ por 100g Racemato 91.00 89.00 160.00 3.00 5.00 5.25

isoleucina 28.00 7500.00 18.00* metionina 7.25 65.00 1.40 prolina 17.00 1430.00 168.00 fenilalanina 13.50 76.00 12.75 triptfano 22.00 62.00 15.00 serina 22.00 100.00 8.75 Treonina 29.00 100.00 20.00 cisteina Haga15.00 clic para modificar el estilo de subttulo del patrn 1840.00* 210.00* tirosina 7.90 510.00 44.80 asparragina 6.00 33.50 6.00 glutamina 6.50 710.00 Ac asprtico 2.95 47.00 2.85 Ac glutmico 1.25 110.00 7.00 Lisina 2.85 460.00 9.90 Arginina 6.00 690.00 90.00 Histidina 12.00 250.00 30.00

Produccin industrial Aminocido Alanina valina leucina L 14.00 13.25 8.25 D

Precios en 1983 en $ por 100g Racemato 91.00 89.00 160.00 3.00 5.00 5.25

isoleucina 28.00 7500.00 18.00* metionina 7.25 65.00 1.40 prolina 17.00 1430.00 168.00 fenilalanina 13.50 76.00 12.75 triptfano 22.00 62.00 15.00 serina 22.00 100.00 8.75 Treonina 29.00 100.00 20.00 cisteina Haga15.00 clic para modificar el estilo de subttulo del patrn 1840.00* 210.00* tirosina 7.90 510.00 44.80 asparragina 6.00 33.50 6.00 glutamina 6.50 710.00 Ac asprtico 2.95 47.00 2.85 Ac glutmico 1.25 110.00 7.00 Lisina 2.85 460.00 9.90 Arginina 6.00 690.00 90.00 Histidina 12.00 250.00 30.00

Produccin industrial Aminocido Alanina valina leucina L 14.00 13.25 8.25 D

Precios en 1983 en $ por 100g Racemato 91.00 89.00 160.00 3.00 5.00 5.25

isoleucina 28.00 7500.00 18.00* metionina 7.25 65.00 1.40 prolina 17.00 1430.00 168.00 fenilalanina 13.50 76.00 12.75 triptfano 22.00 62.00 15.00 serina 22.00 100.00 8.75 Treonina 29.00 100.00 20.00 cisteina Haga15.00 clic para modificar el estilo de subttulo del patrn 1840.00* 210.00* tirosina 7.90 510.00 44.80 asparragina 6.00 33.50 6.00 glutamina 6.50 710.00 Ac asprtico 2.95 47.00 2.85 Ac glutmico 1.25 110.00 7.00 Lisina 2.85 460.00 9.90 Arginina 6.00 690.00 90.00 Histidina 12.00 250.00 30.00

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Poca importancia econmica por difcil separacin Hasta aos 50 glutmico por hidrlisis del gluten Hoy mezclas de hidrolizados (poco importantes)

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Aminacin de -halo cidos Va sntesis de Gabriel Via sntesis de Strecker

Acido L-glutmico L-lisina L-metionina

Aminacin de -halo cidos

Hell-Volhard-Zelinsky

Es la forma ms inmediata de introducir un grupo amino en a un cido carboxlico

CH3 H C H COOH

Br2 + PBr3 H Br

CH3 H C Br COOH
80%

Rendimientos 25C NH relativamente bajos 3 Vlido para: glicina, modificar el estilo de subttulo del patrn 4 dias Haga clic para alanina, serina, treonina, valina, leucina, nor H 2O H Br leucina.

CH3 H C NH3 COO

56%

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Aminacin de -halo cidos Va sntesis de Gabriel Via sntesis de Strecker

Acido L-glutmico L-lisina L-metionina

Va sntesis de Gabriel

2-bromomalonato de dietilo con ftalimida potsica

O C N C O K

OEt CO H C Br CO OEt
85%
K Br

O C N C O

OEt CO C H CO OEt

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

EtONa

O C N C O

OEt CO C R CO OEt

OEt CO N C CO OEt Na

RX

X Na

C O

Va sntesis de Gabriel

2-bromomalonato de dietilo con ftalimida potsica Vlido para muchos aminocidos.

O C N C O

OEt CO C R CO OEt

OH CO N C R CO OH

H 2O
H 3O

C O

CO2

O C

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

O C N C O H C R CO OH

OH C O OH

H H3N C R CO O

H 2O
H 3O

Glicina (R=H)85%

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Aminacin de -halo cidos Va sntesis de Gabriel Via sntesis de Strecker

Acido L-glutmico L-lisina L-metionina

Via sntesis de Strecker

Aldehdos y cianuro en presencia de amoniaco

R C

O H

NH3
H 2O

R C

NH H

H CN

NH2 R C CN H
H3O

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

NH3 R C COO H
Alanina (R=H)55%

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Aminacin de -halo cidos Va sntesis de Gabriel Via sntesis de Strecker

Acido L-glutmico L-lisina L-metionina

Sntesis del cido L-glutmico

Hidroformilacin de acrilonitrilo y sntesis de Strecker

N C CH CH2

CO + H2

N C CH2 CH2 CHO

NH3
H 2O

H CN

N C CH2 CH2 H C NH2 C

H 3O

O C OH CH2 CH2 H C NH3 C OH O

Cat = Co

N Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

El cido glutmico es el principal ingrediente de las pastillas de caldo y de sopas en polvo. Tiene sabor a carne y se dice que refuerza el sabor de los otros ingredientes

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Aminacin de -halo cidos Va sntesis de Gabriel Via sntesis de Strecker

Acido L-glutmico L-lisina L-metionina

Sntesis de L-lisina

Cianoetilacin de acetaldehido, sntesis de hidantoina e hidrogenacin cataltica

CH3

OR

CH2 CH 2 HC O

CH2

C N
H CN

HC O H2C C C N

Industria solo 3 pasos

CH2 CH2 CH OH N C

CH2

C N CH2 CH2

H CN

CO2

NH3
CH 2 CH2 CH2 C N

NH3

CH2

C N

CH NH hidantoina CH NH2 CO2 O patrn C O HagaO C clic para modificar el estilo de subttulo delC NH NH2
H2
H 2O

H2

CH2 CH2 CH NH O C NH C O

CH2

CH2 NH2
H 2O

CH2 CH2 CH NH2 O C OH

CH2

CH2 NH2

Sntesis de L-lisina

A partir de caprolactama o cido -amino caproico va halogenacin en

NH 2 CO OH

NH CO CO Cl CO OH NH CO CO Br OH Br2

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

NH3 NH3 CO NH3 OH

H 2O

H 3O

NH CO CO NH 2 OH

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Aminacin de -halo cidos Va sntesis de Gabriel Via sntesis de Strecker

Acido L-glutmico L-lisina L-metionina

Sntesis de L-metionina

A partir de acrolena metanotiol a travs de metilmercaptoetilhidantoina

CH3 CH

CH2

Oxid

O CH CH

CH 2

CH 3 SH
CH2 CH2 S CH3

CH2 CH 2 S CH 3

NH3

CH C N

CO2 O H
CH2 CH 2 S CH3

H CN

CH

CH C O Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn CH 2 CH 2 S CH3 H 2O NH NH CH C O C CO3K2 OK NH2 O hidantoina
L-metionina se consume a gran escala para enriquecer piensos compuestos

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Conversin en diasteroismeros Destruccin de un enantimero Transformacin de un enantimero

Conversin en diasteroismeros Proteger el grupo amino en forma de amida y tratar el producto resultante con un enantimero de una amina quiral. Los diasteroismeros que se obtienen se separan por solubilidad o cristalizacin fraccionada

Rendimientos bajos Recristalizaciones sucesivas Haga clic para modificar el estilo de ser ms soluble o Difcil predecir que diasteroismero subttulo del patrn que amina quiral interesa.

Reactivos caros que se consumen

Conversin en diasteroismeros
H H3N C COO CH3 CH CH3 HCOOH O O H CH

Resolucin de DL-valina
O H BH CH

HC HN C COO CH 3 CH3

HC HN C COO CH3 CH3 COO H CH

COO H 3N C CH3 CH H CH3

COO H CH3 O CH

BH
B = Brucina 80%
H

BH

HC HN C CH3 H

HC HN C CH3

CH3

70%

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn NaOH H3N C COO HC HN C COO H 2O
CH3 CH CH3

BH

OC
O

CH3

CH

CH3

Cristalizacin fraccionada
BH

COO

COO H CH

70%

H3N C CH3 CH

H CH3

NaOH H 2O
OC

HC HN C CH3

CH3

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Conversin en diasteroismeros Destruccin de un enantimero Transformacin de un enantimero

Destruccin de un enantimero

Resolucin biolgica Se alimenta un animal o microorganismo con el racemato, metaboliza el L (normalmente) y se asla el D del medio de cultivo o orina del animal

Poco til y solo para preparar el D Resolucin enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn D-aminocido oxidasa del rin L-aminocido oxidasa de la serpiente de cascabel Destruyen un ismero y no el otro. Tambin poco rentable

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Conversin en diasteroismeros Destruccin de un enantimero Transformacin de un enantimero

Transformacin de un enantimero

Resolucin cintica Una enzima convierte un enantimero en otro producto y despus de separados pueden recuperarse ambos. Ejemplo: La acilasa renal del cerdo cataliza la hidrlisis de los enlaces amida pero es especfica para las amidas de los L-aminocidos

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn AcOAc DL-leucina N-acetil-DL-leucina acilasa renal del cerdo

N-acetil-D-leucina

L-leucina

Produccin de aminocidos Produccin industrial Hidrlisis de protenas Sntesis qumica Resolucin de racematos Sntesis microbiolgica o enzimtica Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

La fabricacin de productos qumicos mediante microorganismos es una de las ramas de la Biotecnologa Acido L-glutmico y L-lisina Una cepa bacteriana se cultiva en un tanque con azcar y se aade aire y amoniaco manteniendo el pH y temperatura en rangos. fisiolgicos

Con Corynebacterium Glutamicum, por cada kilo de glucosa se obtiene kilo de cido L-glutmico Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn L-lisina tambin se obtiene por fermentacin

Biosntesis de aminocidos A partir de amoniaco y carbohidratos (-cetocidos) se sintetizan en el organismo en presencia de enzimas reductoras Sntesis de glutmico Aminocidos esenciales: Arginina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano y valina.
O C O O H H 3N C

NH 3
L-glutamato deshidrogenasa

O O

C O O

C O O Ac. glutmico

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn -cetoglutarato

Sntesis de aminocidos

COO C R NH 3 H
transaminasa

COO R C O
-cetocido

L-aminocido

Aminocidos y Pptidos
Aminocidos Anlisis de Pptidos
Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Pptidos

Anlisis de Pptidos
Hidrlisis Esterificacin Degradacin en una etapa Degradacin secuencial Otros mtodos de secuenciacin

HCl 6N a 105C (no bases por racemizacin) patrn Haga clic para modificar el estilo de subttulo del Triptofano se destruye en la hidrlisis Glutamina y asparragina dan amoniaco y cidos glutmico y asprtico Anlisis: bsicos (pH=5,3),neutros (pH=4,25), cidos (pH=3,25),

Anlisis de Pptidos
Hidrlisis Esterificacin Degradacin en una etapa Degradacin secuencial Otros mtodos de secuenciacin

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn Se identifica el NH2 terminal el COOH terminal con un grupo identificable y no hidrolizable. Se hidroliza el pptido marcado Se identifica el aminocido terminal

Anlisis de Pptidos
2,4-dinitrofluorbenceno
NO2 NO2 F

Degradacin en una etapa

Reactivos para identificar NH2 terminales FDNB Sanger

NO2 NO2

Despus de la hidrlisis
Amarillo, se extrae con cloroformo (los dems productos de hidrlisis ionizados no se extraen)

COOH R C H

NH

Cloruro de dimetilaminonaftalen-5-sulfonilo Cloruro de dansilo

CH 3 CH 3 N O S Cl O

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

DNS-Cl

Despus de la hidrlisis

CH3 CH3 N O S O

COOH R NH C H

Anlogo a FDNB pero fluorescente (detecta cantidades mnimas)

Anlisis de Pptidos
Reduccin con borohidruro de litio

Degradacin en una etapa

Reactivos para identificar COOH terminales BH4Li

Despus de la hidrlisis BH4Li

Se separa el amino-alcohol en medio bsico (los dems ionizados y l no)

CH2OH R NH2 C H

Hidrazinolisispara modificar el estilo de subttulo del patrn NH2-NH2 Haga clic Despus de la hidrlisis NH2NH2
CO NH NH2 R NH2 C H R NH 2

COOH C H

El terminal queda libre y los dems como hidracidas

Anlisis de Pptidos
Hidrlisis Esterificacin Degradacin en una etapa Degradacin secuencial Otros mtodos de secuenciacin

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn Permiten la identificacin sucesiva de los aminocidos, utilizando una sola muestra de pptido El mtodo ms utilizado es el de Edman Identifica un amino terminal y deja el resto del pptido intacto para repetir el proceso

Anlisis de Pptidos
S

Degradacin secuencial Degradacin de Edman

+ H NH CH CO NH CH CO N C R1 R2 1) Adicin en medio bsico de isotiocianato de fenilo

H S N C NH

NH CH COOH R3

CH CO NH CH CO R1 R2

NH CH COOH R3

2) Hidrlisis suave solo del terminal con HCl en para modificar el estilo de subttulo del patrn Haga clic CH3NO2 Actico + HOO C O C H CH R1 S CH R1 N N NH C NH C
S

NH2

CH CO R2

NH CH COOH R3

Mejora de este es soportar mediante el COOH a un polmero el pptido e ir degradando secuencialmente

Puede repetirse el proceso con el resto hasta 30 ms veces si el pptido es grande

Tiohidantoina

Anlisis de Pptidos
Hidrlisis Esterificacin Degradacin en una etapa Degradacin secuencial Otros mtodos de secuenciacin

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn Espectrometria de masas Resonancia magntica nuclear

Aminocidos y Pptidos
Aminocidos Anlisis de Pptidos
Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Pptidos

Sntesis de Pptidos
Introduccin, dificultades y secuencia Bloqueo del grupo amino Bloqueo del grupo carboxilo Activadores del grupo carboxilo Sntesis en modificar Haga clic para fase slidael estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Pptidos
Importancia cientfica Importancia tecnolgica Facilidad aparente

Introduccin, dificultades y secuencia

La obtencin de un enlace amida es fcil por ejemplo:

R C

SOCl2

R C

R NH2

R C

OH Cl R NH Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn No puede emplearse pues al ser un aminocido polimeriza. O
Deshidratante

R C

OH

R NH2

R C R

NH

Tampoco puede emplearse por reacciones secundarias.

Sntesis de Pptidos
Importancia cientfica Importancia tecnolgica
R C

Introduccin, dificultades y secuencia

COOH H

COOH C R NH 2 H

Facilidad aparente Dificultades

NH 2

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn COOH COOH COOH 1) Si entre dos aminocidos distintos C C C cuatro dmeros posibles H H H R R R NH NH NH
CO C R NH 2 H R CO C NH2 H R CO C NH2 H

COOH C R NH CO C R NH 2 H H

Sntesis de Pptidos
Importancia cientfica Importancia tecnolgica
R C

Introduccin, dificultades y secuencia

COOH H

COOH C R NH 2 H

Facilidad aparente Dificultades

NH 2

Condiciones enrgicas Lenta

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn R 2) Hay que activar los NH grupos reaccionantes C Rpida C O para condiciones suaves. H C R C O NH H 2,5-dicetopiperazina

COOH C R NH CO C R NH 2 H H

Sntesis de Pptidos
Importancia cientfica
COOH

Introduccin, dificultades y secuencia

COOH C NH 2 H
H H X X H H N N C C O O B

R R C C C C O O

Importancia tecnolgica Facilidad aparente Dificultades DR H C C O O

C R NH 2

H R

C C

Medio bsico

NH2 NH2

R R H H

Enol no quiral LNHaga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn
C C NH 2 R H
R H N C O C O C C NH2 R H

R H C C O

N C O C NH2 R H

3) Hay que evitarla racemizacin de los centros quirales y por ello los medios fuertemente bsicos que generan oxazolonas.

Sntesis de Pptidos
Importancia cientfica Importancia tecnolgica Facilidad aparente Dificultades Secuencia
R

Introduccin, dificultades y secuencia 1) Proteger el COOH deseado

X COOH
C H
R

COOH C NH2 H

NH 2 Z

2) Proteger el NH2 deseado 3) Activar el COOH como COX

Haga clic para modificar el estilo de subttulola reaccin 4) Realizar del patrn

COOH C R NH CO C R H H

Y X COOH
C R H

5) Desproteger el NH2 del pptido 6) Aadir un nuevo aminocido activado y protegido en el grupo amino

NH 2 Z

NH 2Z

Sntesis de Pptidos
Introduccin, dificultades y Introduccin y dificultades secuencia Bloqueo del grupo amino Bloqueo del grupo carboxilo Activadores del grupo carboxilo Sntesis en modificar Haga clic para fase slidael estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Pptidos
Cloruro de p-toluenosulfonilo Tosilo

Bloqueo del grupo amino Eliminarlo Ts Na en NH3

COOH
O CH3 S Cl O

O R CH3 S O

C NH H

Cloruro de trifenilmetilo modificar el estilo de subttulo del patrn Haga clic para Tritilo Tt

H2 (Pd)

COOH R
C Cl
C

C NH H

Sntesis de Pptidos
Cloruro de p-toluenosulfonilo Cloruro de trifenilmetilo Cloroformiato de terbutilo Tosilo Tritilo

Bloqueo del grupo amino Eliminarlo Ts Tt Na en NH3 H2 (Pd) H2 (Pd)

Butiloxicarbonil boc

CH3 CH3 C O C CH3 O Cl

CH 3

COOH
CH3 C O C

C NH H

CH3 O Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Monoazida del carbamato de terbutilo

Butiloxicarbonil boc

H2 (Pd)

CH3 CH3 C O C N N N CH3 O

CH 3

COOH
CH3 C O C CH3 O

C NH H

Sntesis de Pptidos
Cloruro de p-toluenosulfonilo Cloruro de trifenilmetilo Cloroformiato de terbutilo Monoazida del carbamato de terbutilo Tosilo Tritilo

Bloqueo del grupo amino Eliminarlo Ts Tt Na en NH3 H2 (Pd) H2 (Pd)

Butiloxicarbonil boc Butiloxicarbonil boc

H2 (Pd) H2 (Pd)

Cloroformiato de bencilo Carbobenzoxi cbz Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

COOH
CH 2 O C O Cl
CH2 O C O

C NH H

Sntesis de Pptidos
Cloruro de p-toluenosulfonilo Cloruro de trifenilmetilo Cloroformiato de terbutilo Monoazida del carbamato de terbutilo Tosilo Tritilo

Bloqueo del grupo amino Eliminarlo Ts Tt Na en NH3 H2 (Pd) H2 (Pd)

Butiloxicarbonil boc Butiloxicarbonil boc

H2 (Pd) H2 (Pd) Bases dbiles

Cloroformiato de bencilo Carbobenzoxi cbz Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn Cloruro de trifluoracetilo Trifluoracetil tfa

COOH

CF3

C Cl O
CF3 C O

C NH H

Sntesis de Pptidos
Introduccin, dificultades y Introduccin y dificultades secuencia Bloqueo del grupo amino Bloqueo del grupo carboxilo Activadores del grupo carboxilo Sntesis en modificar Haga clic para fase slidael estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Pptidos
Metanol etanol
CH3 O H

Bloqueo del grupo carboxilo Eliminarlo Bases dbiles

O C H C R NH2

Esteres
CH3

Alcohol benclico

Esteres

Bases dbiles
O C H C R NH2

CH2 O H Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn CH2 O

terbutanol
CH 3 CH3 C O H CH 3

Esteres
CH3 CH3 C O CH3

H2 (Pd)
O C H C R NH2

Sntesis de Pptidos
Introduccin, dificultades y Introduccin y dificultades secuencia Bloqueo del grupo amino Bloqueo del grupo carboxilo Activadores del grupo carboxilo Sntesis en modificar Haga clic para fase slidael estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Pptidos
Cloroformiato de isobutilo

Activadores del grupo carboxilo BOC

O CH3 CH2 CH O C CH3 Cl

CH3

O CH3 CH2 CH O C O

O C

H C R NH Bloq

Diciclohexilcarbodiimida

DCCI

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

N C N
NH

C O

O C

H C R NH Bloq

Sntesis de Pptidos
Protecting group Methyl Formyl Ethyl Acetyl t-Butyl Anisyl Benzyl Mass Change 14.027 (Me) 28.104 (CHO) 28.054 (Et) 42.037 (Ac) 56.108 (tBu) 90.126

Otros grupos protectores 120.151 (Bom) 121.095 (ONp) 134.134 (Z) 149.106 (NBz) 153.161 (Nps) 154.189 (Tosyl,Tos) 166.050 (Pfp) 166.222 (Dpm)

Benzyloxymethy 4-Nitrophenyl Benzyloxycarbonyl 2-Nitrobenzoyl 2-Nitrophenylsulphenyl 4-Toluenesulphonyl Pentafluorophenyl Diphenylmethyl (Dpm)

90.126 2-Chlorobenzyloxycarbonyl 168.579 (Cl-Z) (Bzl) (Tfa) TrifluroacetylHaga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn 96.009 179.432 N-hydroxysuccinimide 97.073 (ONSu OSu), 2,4,5-trichlorophenyl 2-bromobenzyloxycarbonyl 213.031 (Br-Z) t-Butyloxycarbony 100.117 (Boc) 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl 222.243(Fmoc) 104.108 (Bz) Benzoyl Tripheylmethyl 242.320 (Trityl, Trt) 104.152 (Meb) 4-Methylbenzyl 2,2,5,7,8-pentamethyl-chroman-6-sulphonyl 106.191 Thioanizyl 266.361 (Pmc) Thiocresyl 106.191

Sntesis de Pptidos
Introduccin, dificultades y Introduccin y dificultades secuencia Bloqueo del grupo amino Bloqueo del grupo carboxilo Activadores del grupo carboxilo Sntesis en modificar Haga clic para fase slidael estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

Cl4Sn
Cl CH2 O Et

Clorometilacin Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn electroflica

Poliestireno

Preparacin del soporte

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

Cl4Sn
Cl CH2 O Et

Clorometilacin Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn electroflica

Poliestireno

Preparacin del soporte

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

Cl

Cl Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

R

CH 2

O C CH NH CO O

Anclaje de un aminocido protegido Poliestireno funcionalizado 1 al 10 %

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

CF3 COOH
CH O clic para modificar el estilo de subttulo del patrn 2Cl2 O Haga C
R CH NH CO O
Desproteccin del grupo amino Primer aminocido anclado

CH 2

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

Cl

O C CO O

O R

O Haga clic para modificar el estilo de subttulo R patrn NH del CH

CH 2

CH NH 2

Anclaje del segundo aminocido protegido Primer aminocido anclado

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

CH2Cl2

CF3 COOH
O R C O Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn O C CH NH CO O
Segundo aminocido anclado Desproteccin del grupo amino

CH 2

CH NH R

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

HF
O R O Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn O C CH NH 2
Desanclaje del pptido del polmero Segundo aminocido anclado

CH 2

CH NH R

Sntesis de Merrifield
FASE SLIDA INSOLUBLE

FASE LIQUIDA

O OH

OH C

O CH 2 R CH NH C F Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn O C R CH NH C R

Pptido obtenido

CH NH 2

CH NH2
Liberacin del pptido

Cl CH 2 O Et

O R

O C CH NH CO O

Cl4Sn

Sntesis de Merrifield

Cl

CH2

CH2Cl2
CF3 COOH

Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn O

O C CH NH CO O O O O C R O O C CH2 CH 2

O C

CH2

R CH NH CO O

R CH NH 2

R CH NH C R

CH NH2 CO O

HF
Cl
F CH 2

Aminocidos y Pptidos
Ha finalizado la exposicin Muchas gracias por su atencin
Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Pedro Antonio Garca Ruiz

Catedrtico de Escuela Universitaria Area Qumica analtica Profesor Titular de Universidad Area Qumica Orgnica

Departamento de Qumica Orgsnica - Universidad de Murcia

Aminocidos y Pptidos
Aminocidos Anlisis de Pptidos
Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

Sntesis de Pptidos