ARNt

Es un RNA pequeo que posee una estructura en hoja de trbol, teniendo tres brazos diferentes.

Extremo 3': lugar de unin al aminocido (contiene siempre la secuencia ACC). Lazo dihidrouracilo (DHU): lugar de unin a la aminoacil ARN-t sintetasa o enzimas encargadas de unir un aminocido a su correspondiente ARN-t. Lazo de T C: lugar de enlace al ribosoma. Lazo del anticodn: lugar de reconocimiento de los codones del mensajero.

Transcripcin del ADN

El ARN se sintetiza sobre un molde de ADN, proceso conocido como transcripcin y genera: ARNm ARNt ARNr Otros ARN.

 Estas molculas de ARN son sintetizadas por enzimas ARN polimerasas.

Las enzimas encargadas del proceso de transcripcin corresponden a: RNA polimerasa I: Encargada de transcribir RNA ribosomal RNA polimerasa II: Encargada de transcribir RNA mensajero RNA polimerasa III: Encargada de transcribir RNA de transferencia

 Algunas de las secuencias consenso importantes en la transcripcin son:

CAAT Box: Es una secuencia que se encuentra 75-80 pB corriente arriba del promotor. TATA Box: Es una secuencia que se encuentra 25 pB corriente arriba del promotor. En esta zona se completa el complejo de iniciacin de la transcripcin. Promotor: Es una zona pre-gnica en donde el DNA es abierto por una helicasa y las enzimas responsables de la transcripcin comienzan la sntesis de RNA. Unidad de transcripcin: Corresponde a toda la zona del DNA que ser transcrita. Secuencia trmino: Indica a las enzimas correspondientes que la transcripcin del/los genes termina all. Secuencias enhancers (potenciadoras) y silencers (inhibidoras): Son secuencias que regulan la expresin de la unidad de transcripcin.

Existen 21.000 genes en la especie humana, por lo que existen secuencias especiales para poder transcribirlos. La secuencia que denota el lugar donde debe iniciarse la transcripcin se conoce como promotor.

 Las etapas de la transcripcin corresponden a la iniciacin, elongacin y terminacin.

Elongacin
Desde el nucletido siguiente al promotor comienza la sntesis de RNA complementario a la cadena molde de DNA. Al momento de iniciar la transcripcin se agrega el CAP al RNAhn. Contina hasta que la RNA polimerasa II se encuentra con una regin de trmino.

Terminacin
Cuando la RNA polimerasa II se encuentra con la regin de trmino, la enzima se libera, el DNA vuelve a enrollarse y el RNAhn ya est completo.

Modificacin post-transcripcional
La adicin: De un casquete de metilguanina (CAP) al extremo 5. De una cola de poli-A al extremo 3 al terminar la transcripcin.

Empalme o "splicing"
Se produce remocin de intrones y unin de exones en el RNAm antes de dejar el ncleo.

La traduccin / Sntesis proteica

La traduccin es el paso de la informacin transportada por el ARN-m a protena. Ocurre en el ribosoma. Participan ARN m y ARN t. El ARN mensajero porta la informacin gnetica que especfica la secuencia de aminocidos.

 Existen 20 aminocidos y 20 ARN t. Cada ARN m se une con su respectivo ARN t que porta un a.

Los aminocidos se unen por enlaces peptidicos(peptidil transferasa).

Secuencia de inicio traduccin AUG (Met) se van adicionando aa segn los codones presentes en el ARN m.

Ribosoma
Los ribosomas son complejos supramoleculares ubicados en la superficie del RER en las clulas eucariotas y en el citoplasma en los procariotas. Poseen dos subunidades, con diferentes funciones.

En el marco de la ingeniera gentica las enzimas de restriccin tienen como objetivo A) generar copias de los fragmentos de ADN a recombinar. B) cortar un segmento de ADN para recombinar. C) unir segmentos de ADN a recombinar con ADN del vector. D) degradar copias defectuosas de ADN recombinante. E) limitar el nmero de copias que se hacen del ADN a recombinar.

Subunidad menor: Formada por RNAr de 18S en eucariotas + protenas. Su funcin es identificar el sitio de inicio de la traduccin. Subunidad mayor: Formada por RNAr de 5S, 5,8S y 28S en eucariotas. Cmara P (peptidil): Es la primera cmara donde se posiciona un codn (53). En esta cmara se encuentra una enzima llamada peptidil transferasa. Cmara A (aminoacil): Es la segunda cmara donde se posiciona otro codn. Cmara E: Cmara por donde se libera el RNA mensajero ya ledo.

ACTIVACIN DE LOS AMINOCIDOS Y FORMACIN DE LOS COMPLEJOS DE TRANSFERENCIA

Iniciacin
La iniciacin comienza cuando la subunidad menor del ribosoma recorre el RNA mensajero buscando la secuencia de iniciacin (mediada por protenas y RNAr). Una vez encontrada, un RNA de transferencia correspondiente al codn AUG (codn de inicio) se posiciona en l, cargando el aminocido metionina. Finalmente la subunidad mayor se posa sobre la subunidad menor, quedando el metionil-RNAt dentro de la cmara P. El codn adyacente a AUG est posicionado dentro de la cmara A. El aminoacil-RNAt

Elongacin
La peptidil transferasa crear un enlace peptdico entre los aminocidos adyacentes. Con la formacin de aquel dipptido, el ribosoma avanzar en el sentido 5-3 una distancia equivalente a un codn, desplazando el metionil-aminoacil-RNAt que estaba en la cmara A hacia la cmara P. El RNAt que traa el aminocido metionina sale del ribosoma para ser cargado nuevamente por la metionil RNAt sintetasa. En este momento, entrar a la cmara A otro RNAt correspondiente, y nuevamente la peptidil transferasa creara un enlace peptdico entre el dipptido mencionado y el nuevo aminocido. Con

Terminacin
La terminacin ocurre cuando uno de los tres codones de terminacin entra en el sitio A. Estos codones no son reconocidos por ningn ARNt. En cambio, son reconocidos por unas protenas llamadas factores de liberacin. Estos factores disparan la hidrlisis del enlace ster de la peptidil-ARNt y la liberacin del ribosoma de la protena recin sintetizada. O fin de la fase.

El CODIGO GENTICO
Es una clave que establece la correspondencia entre una secuencia de bases nitrogenadas del ARNm con una secuencia de AA de una protena.

Codn

CCU

 Caractersticas del cdigo gentico: El cdigo posee toda la informacin para llevar a cabo su funcin (control del metabolismo) y es lo suficientemente estable como para que, tras la reproduccin, los descendientes estn dotados de la misma informacin.

El cdigo es degenerado.

 Existen codones-stop que no codifican AA y Asimismo, hay un codn (AUG, codificador de la metionina) que acta como seal de iniciacin de la traduccin del mensaje. No hay solapamiento de bases, es decir, cada base slo pertenece a un codn.

El cdigo es universal, pues es el mismo en todos los seres vivos.

Ejercicios:

Dada la siguiente secuencia de ADN: 5'-ATCCCTAGTATTATG-3

Escribe la cadena complementaria:

Escribe el ARN m correspondiente a la cadena complementaria:

Escribe la cadena polipeptdica que se origina:

El cdigo gentico es universal. Esto implica que: I) todos los seres vivos tienen los mismos genes. II) la secuencia de ADN que estructura los genes de cualquier organismo es el mismo. III) un triplete de ARN codifica el mismo aminocido en cualquier organismo. Es (son) correcta(s) A) slo I. B) slo II. C) slo III. D) slo II y III. E) I, II y III.

 Se tiene el siguiente gen que se desea expresar: 5GCCCTCAGTATTAACAGCACACTACGTTCAGTC AGTTCTGCGCCTACAACCATTCACT-3 a) Cmo sera el RNA mensajero de aquel gen?

 . Si una protena est compuesta de 146 aminocidos, sin contar el de inicio y trmino de, es cierto que: I. Fue sintetizado a partir de al menos 144 nucletidos de ARNm II. Estn participando en la traduccin al menos 144 codones III. Al menos 432 nucletidos de ADN participaron en la transcripcin A) Slo II B) I y II C) I y III

 . En relacin al proceso de sntesis de protenas a partir de la informacin gentica, es falso que: A) Los ribosomas, estn compuestos por ARNR y protenas, y se ensambla alrededor del ARNm B) La estructura terciaria de una protena est determinada por su secuencia de aminocidos. C) La complementariedad de los codones de ARNm con los anticodones ARNt determinan el orden en la secuencia de aminocidos D) Todos los genes codifican para protenas

 Qu proceso(s) debe(n) ocurrir para que la informacin gentica pueda expresarse? I. Sntesis de protenas. II. Transcripcin de ARN. III. Permutacin cromosmica. A) Solo I B) Solo II C) Solo III D) I y II

Tcnicas de Biologa Molecular

ENZIMAS DE RESTRICCIN: HERRAMIENTA FUNDAMENTAL EN EL ANLISIS DEL ADN

Las enzimas de restriccin encuentran en bacterias.

se

Reconocen una secuencia especfica (4-6 pares de bases) en una molcula de ADN y cortan el ADN. Las enzimas obtenidas de bacterias: de restriccin son varias especies de

EcoRI (Escherichia coli).

Las enzimas de restriccin producen fragmentos de ADN que pueden ser fcilmente unidos. Los fragmentos con los mismos extremos cohesivos se pueden unir por complementariedad de sus bases.

 Amplifica una secuencia especfica de ADN. Tiene numerosas aplicaciones en diferentes reas

Ciclos de la tcnica de PCR

Denaturacin del ADN (95C).

Apareamiento con el primer (generalmente a (50 65C).

Extensin de los primers (72C).

Repeticin del ciclo

 PCR se realiza en un Termociclador.

Es una mquina que calienta y enfra la reaccin en periodos cortos de tiempo.

Se puede amplificar directamente de: ADN genmico.

Aplicaciones: Deteccin de agentes infecciosos como: hepatitis B y C, papiloma virus, HIV, entre otros.

Anlisis de DNA de cualquier organismo vivo o muerto, anlisis de fsiles.

Investigacin forense. Pruebas de paternidad.

Tecnologa del DNA recombinante

La tcnica consiste en insertar el gen que se desee insertar en el cdigo gentico de un vector (Virus, Bacteria)Como se estn combinando genes de dos especies de vida diferente, se le denomina Tecnologa Recombinante del ADN.

Cmo se realiza?
Para recombinar DNA, se requiere identificar una fuente, extraer su DNA, amplificarlo a travs de PCR y finalmente transferirlo a travs del uso de vectores. Los vectores que generalmente se utilizan suelen ser virus (por ejemplo, los Fagos T4 para la transferencia del gen de la insulina recombinante).

 Fue un proyecto comenzado en 1990, cuyo objetivo principal era la secuenciacin total del genoma humano (los 22 pares de autosomas + el par sexual) y establecer la localizacin de todos los genes que forman los cromosomas humanos.