CINTICA ENZIMTICA

E + S

SE

E + P

Protenas con actividad cataltica de los seres vivos. Unidades del Metabolismo Regulan la vel. de las reac. qum. espontneas (DG-). No promueven reacciones no-espontneas (DG +). Incrementan la Vel. De reaccin 103 a 1012 veces sin afectar el sentido de la reaccin. No forman parte del producto de la reaccin.

PROPIEDADES GENERALES
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN
De 106 to 1012 veces vs sin enzima. An ms rpido que los catalizadores qumicos.

CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC) pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5 Presin atmosfrica normal

CAPACIDAD DE REGULACIN
Por concentracin de sustrato Por concentracin de enzima Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato) Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima) Por regulacin alostrica

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN

Interaccin estereoespecfica con el sustrato No hay productos colaterales

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN

INTERACCIN ESTEREO ESPECFICA CON SU SUSTRATO

Los Substratos se acercan a la Enzima (sitio Activo)

Substratos

HO-

HEnzima

Los reactivos
interaccionan con la enzima (sitio activo)

Cambia la configuracin de la

enzima

Substrato de glucosa

Sitio de enlace

La unin del sustrato produce un cambio conformacional de la enzima hexoquinasa (cinasa), la cual es monomrica.

Se realiza la reaccin cataltica

Leonor Michelis y Maud Menten (1913) Concent.

Tiempo

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
Vo = V
max

[S]

Km + [S]

Cintica enzimtica en funcin de la concentracin de sustrato

Vmax

KM

Km de algunas enzimas
ENZIMA Catalasa Hexoquinasa SUSTRATO H2O2 ATP D-Glucosa D-Fructosa Anhidrasa carbnicoa Quimotripsina -Galactosidasa Treonina deshidrogenasa HCO3Gliciltirosinilglicina N-Benzoiltirosinamida D-Lactosa L-Treonina Km (mM) 25.0 0.4 0.05 1.5 9.0 108.0 2.5 4.0 5.0

La KM es un parmetro de Actividad Enzimtica

La KM es inversamente proporcional con la actividad de la enzima. Valor de KM grande, baja actividad
Valor de KM pequeo, alta activida

Enzimas: pueden catalizar reacciones donde hay 2 S =

Hexocinasa

ATP + Glucosa ADP + 6-fosfato de glucosa

2 Rutas Desplazamiento Simple, los 2 S se unen a la E A + B + E EAB C + D

Doble desplazamiento o ping-pong A + B + E AE BE + C D

Determinacin Cuantitativa de la Cintica Enzimtica 1. La reaccin global 2. Procedimeinto analtico para determinar elS que desaparece o el P que aparece 3. S el E requiere Cofactores (ines o coenzimas)

4. La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o se la KM del S.

5. El pH ptimo 6. Un intervalo de temperatura en la que la E es estable y muestra actividad elevada.

Actividad enzimtica y variacin del pH

Enzima
Pepsina

pH ptimo
1.5 7.7 7.6 9.7 7.8 7.8

Vo

Tripsina Catalasa Arginasa Fumarasa

3 pH

11

14

Ribonucleasa

Vo

Vo

Vo

37 85 Temperatura oC)

10

50 100 Coenzima

10

30 50 70 100 Tiempo (min)

1.0 Unidad de Actividad Enzimtica (U): La cantidad que transforma 1.0 mmol (10-6 M) de S /min, a 25 0C, en las condiciones de medida ptima. Actividad especfica: Es el no. de U de una E / mg de protena. Es decir: una medida de la pureza de la E. Al purificarla, el valor llega a un mximo y es estable. Nmero de recambio No. de molculas de S transformadas /unidad de tiempo, por una molcula de E ( o por un solo sitio cataltico) Enzima No. de Recambio 36 000 000 1 000 000 12 000 1 240

Anhidrasa carbnica B-Amilasa B-Galactosidasa Fosfoglucomutasa

Vmax?
KM?

Transformacin de los Dobles Recprocos (Lineweaver-Burk)

pendiente

Grfica de Eadie-Hofstee
Vmax

Vo

V max
KM
Vo [S]

Cuando: Vo= Vmax Todos los sitios activos estn ocupados y no hay molculas de E libre. KM= [S] S... Vmax KM representa la cantidad de sustrato necesaria para fijarse a la mitad de la E disponible y producir la mitad de la Vmax

KM representa la concentracin del sustrato en una clula

Inhibidores
Reactivos qumicos especficos que pueden inhibir a la mayor parte de las enzimas.
Irreversibles

INHIBIDORES
Reversibles

Inhibidor Irreversible
Inhibicin permanente

Unin irreversible por medio de enlaces covalentes.

Modificaciones qumicas de los gps. catalticos. Modificada la enzima, est siempre inhibida. Para distinguirlo de los reversible se someten a dilisis y si no se separan enzima e inhibidor, ste es permanente.

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP) Acetilcolina

Acetilcolinesterasa

Acetato + Colina

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)

Acetilcolinesterasa

Tripsina
Elastasa Fosfoglucomutasa Cocoonasa (larvas de gusanos de seda
Malatin

Fluorofosfato de diisopropilo (DFP)

Serina

Iodoacetamida

Cistena

Histidina

Inhibidor Reversible
La unin del inhibidor y la enzima es reversible. Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la actividad. Hay 3 tipos: Competitiva No Competitiva Acompetitiva (Alostrica)

Antibiticos Insecticidas Hervicidas Venenos Diferentes Medicamentos Inhibicin enzimtica Dolor Inflamacin

Infecciones virales
Cncer

Inhibicin Competitiva

Vmax igual KM diferente

Inhibidores Competitivos
Malonato Deshidrogenasa del cido succnico

Sulfas

Infecciones microbianas

Antihipertensores: Captopril y Enalopril Alopurinol Fluoruracilo Controla la gota Cncer

Inhibicin No Competitiva
El inhibidor NO se une al sitio activo

NO se puede revertir con un exceso de sustrato

Vmax diferente KM igual

Cinticas de Inhibicin
1 V
No competitivo Vmax diferente KM igual Competitivo Vmax igual KM diferente

No inhibitor

1/[S]

Inhibicin acompetitiva
El inhibidor se une a una SUBUNIDAD reguladora

La subunidad cataltica une al sustrato y cataliza la reaccin