Bq023 Purificao de protenas

Dra. Leda S. Chubatsu

cronograma
31/08 Prova T1 17/11 Prova T2 23/11 2. chamada (somente para casos previstos) 01/12 Exame Final

BIBLIOGRAFIA Scopes, R. K. Protein Purification principles and practice

Volume 182, Pages 1-894 (1990) Guide to Protein Purification Edited by: Murray P. Deutscher ISBN: 978-0-12-182083-1

Aminocidos e peptdeos

Aminocidos estrutura geral

diferenciao pelo grupo R

grupos amino e carboxlico apresentam carga em pH fisiolgico

Classificao dos aminocidos atravs do grupo R

Phe, F

Tyr, Y Trp, W

pKaR = 10.07

Ser, S

Thr, T

Cys, C pKaR=8.18

Asn, N

Gln, Q

pKaR=10.53

Lys, K Arg, R
pKaR=12.48

His, H
pKaR=6.00

pKaR=3.65 Asp, D
Glu, E pKaR=4.25

OUTROS AMINOCIDOS

Reao de xido-reduo de Cistenas

red ox

Modificaes de aminocidos - fosforilao

Modificaes de aminocidos - adenilao e uridililao Tyr

Modificaes de aminocidos ADP ribosilao

Formao da ligao peptdica

Ligao peptdica

N-terminal

amino ou carboxlico da cadeia R

No esto envolvidos na formao da ligao peptdica

C-terminal

Nveis Estruturais

Estrutura super-secundria: motivos

A ligao peptdica planar

Ligao C-N apresenta carter de dupla-ligao (restrio)

A conformao da cadeia peptdica depende da relao f/

f
Ca

H Ca

Ca

Restrio de cadeia R do aminocido ter influncia prolina

a

vs

H N

Conformao da cadeia

Diferentes ngulos f/

Estrutura secundria a-hlice

Restries a formao de a-hlice

presena de Prolina
a

vs

H N

aminocidos com grupo R volumoso prximo ao Ca repulso eletrosttica de grupos R prximos interao entre grupos R localizados 3 (ou 4) resduos de distncia
Arg103 Asp100

a-hlice da troponina C (segmento de 13

residuos). Interao entre grupos Asp100 e Arg103

Estrutura secundria b-conformao

Estrutura secundria volta b

Frequentemente apresentam Glicina e Prolina Gly: pequeno e flexvel Pro: conformao cis

Estrutura super-secundria: motivos

Exemplos:

Estrutura terciria

Estrutura quartenria
(somente para protenas com mais de uma cadeia polipeptdica)

Hemoglobina: a2b2

Glutamina sintetase: 12 subunidades iguais

Tyr a ser modificada

Nveis estruturais
Estrutura Primria: sequncia de aa Estrutura Secundria: arranjo tridimensional local Estrutura Super-secundria: motivos
domnios: unidades conformacionais

Estrutura Terciria: arranjo tridimensional do

polipeptdeo

Estrutura Quartenria: arranjo tridimensional de

protenas multimricas

Conformao: nativa x desnaturada

Protenas globulares apresentam uma regio interna (protegida do solvente) e uma regio exposta ao solvente.

a conformao tridimensional direcionada pela relao:

solvente

- aminocido

aminocido - aminocido.

aspectos gerais (solvente aquoso) Interao hidrofbica (interior)

Ligaes de Hidrognio (interior e exterior) Interaes inicas (exterior)